1、胚胎干細胞(embryonic stem cells,ES cells)是指從胚胎內(nèi)細胞團分離獲得的,能在體外長期培養(yǎng)并保持自我更新能力和分化為所有三個胚層細胞潛能的正常二倍體細胞。ES細胞是細胞治療和組織工程的理想種子細胞來源,可應用于藥物篩選,還是很好的研究胚胎早期分化的模型系統(tǒng)。 胚胎干細胞的高度自我更新能力和分化全能性是它區(qū)別于其它細胞的重要特征,它的特異性分子標志,對于胚胎干細胞的鑒定、分離以及自我更新和分化機制的研究

2、,有著十分重要的意義。尤其是細胞表面分子標志,與細胞外信號系統(tǒng)和細胞間通訊聯(lián)系密切相關(guān),受到廣泛關(guān)注。但是目前發(fā)現(xiàn)的ES細胞分子標志數(shù)量有限,而且與其他的成體干細胞或腫瘤細胞有共同的表達,因此更多更特異的胚胎干細胞分子標志仍有待發(fā)現(xiàn)。胚胎干細胞特異性分子,尤其是膜表面特異分子,具有豐度低、修飾復雜和變化快的特點；胚胎干細胞培養(yǎng)系統(tǒng)復雜,不易大規(guī)模培養(yǎng),加之它的群體異質(zhì)性更增加了特異性分子標志的研究難度。 目前研究胚胎干細胞特異性

3、分子標志的方法主要基于單克隆抗體技術(shù)、轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)和蛋白組學技術(shù)。我們實驗室使用小鼠ES細胞免疫兔,篩選ES細胞特異的兔單克隆抗體,通過免疫共沉淀和質(zhì)譜技術(shù)結(jié)合的方法鑒定抗原來篩選胚胎干細胞的特異性分子標志。目前常用的大部分胚胎干細胞分子標志SSEA-1、SSEA-3、TRA-1-60等并不是直接從胚胎干細胞獲得的,而且所用的免疫動物大多為小鼠。與鼠單抗相比,兔單抗具有更大的優(yōu)勢：首先,兔對外源抗原反應更為敏感,可以對小鼠無免疫原性的抗

4、原產(chǎn)生抗體；其次,兔單克隆抗體具有更高的親和力；第三,對同一種抗原,兔單抗會識別更多不同的表位；第四,兔的脾臟更大,可以產(chǎn)生更多的脾細胞進行融合實驗,有機會篩選到更多的單克隆抗體。通過ES細胞免疫兔的方法可以獲得大量分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株從而建立胚胎干細胞的抗體庫,并可能率選到新的胚胎干細胞分子標志。 在本次實驗中,我們共篩選到了200多株胚胎干細胞特異性的雜交瘤,并選擇了其中20株進一步進行亞克隆,最后獲得了14株穩(wěn)定分

5、泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株。大部分抗體對胚胎干細胞有特異性結(jié)合,并且具有一定的組織表達特異性。細胞免疫熒光和免疫組織化學得結(jié)果顯示：多數(shù)抗體具有較高的特異性,僅在少數(shù)成體組織或其它細胞系中有染色現(xiàn)象,并且多數(shù)抗體的染色在ES細胞分化后會出現(xiàn)染色變?nèi)趸蛳У默F(xiàn)象,說明這些抗體所針對的抗原隨著ES的分化表達降低,這些抗原很有可能會成為未分化胚胎細胞的分子標志。尤其是其中-株雜交瘤59＃,它所分泌的抗體只在ES細胞中有陽性染色,其抗原在成體組