1、軸周蛋白（Periaxin）是成髓鞘的施萬(wàn)細(xì)胞和晶狀體纖維細(xì)胞中特異且大量表達(dá)的一種細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白。Periaxin參與髓鞘中PDG復(fù)合物的形成，是Cajal條帶存在的分子基礎(chǔ)，一旦L-periaxin突變或缺失會(huì)引起過(guò)度髓鞘化或脫髓鞘現(xiàn)象。Periaxin的定位在髓鞘的形成過(guò)程中是不斷變化的，從最初的細(xì)胞核到最后的遠(yuǎn)離軸突的質(zhì)膜處。Periaxin可以編碼含有PDZ結(jié)構(gòu)域的兩種蛋白亞型，分別為L(zhǎng)-periaxin和S-periaxi

2、n。PDZ結(jié)構(gòu)域在Periaxin定位和PDG復(fù)合物形成中具有重要作用，但與其結(jié)合的配體卻未見(jiàn)報(bào)道。EphrinB2是受體酪氨酸激酶家族的一個(gè)成員。EphrinB2配體可以和其對(duì)應(yīng)的受體EphB2之間形成雙向信號(hào)，這種信號(hào)可以直接指導(dǎo)軸突的生長(zhǎng)、細(xì)胞的聚集和遷移、髓鞘的形成。EphrinB2配體包括胞外區(qū)，跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)，在C端包含有PDZ結(jié)合基序。通過(guò)結(jié)合PDZ協(xié)調(diào)組織細(xì)胞膜上的蛋白復(fù)合物。
　　本文對(duì)L-periaxin與Ep

3、hrinB2間的相互作用進(jìn)行了分析。首先，免疫熒光共定位實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明了L-periaxin與EphrinB2在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜上有共定位現(xiàn)象。之后對(duì)L-periaxin與EphrinB2之間的相互作用進(jìn)一步驗(yàn)證，結(jié)果顯示L-periaxin與EphrinB2之間存在相互作用。為了確定EphrinB2與L-periaxin的互作的具體區(qū)域，對(duì)L-periaxin的四個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域分別利用雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)、海腎熒光素酶互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)及免疫共沉淀實(shí)

4、驗(yàn)去分析與EphrinB2間的相互作用，結(jié)果表明L-periaxin的 PDZ結(jié)構(gòu)域與 EphrinB2之間存在著相互作用。將EphrinB2的PDZ結(jié)合基序去掉之后，這種相互作用消失。S-periaxin與L-periaxin有著同樣的PDZ結(jié)構(gòu)域，通過(guò)雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)（BiFC）、海腎熒光素酶互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)、免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)、GST Pull-down實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)，也證實(shí)S-periaxin的PDZ結(jié)構(gòu)域與EphrinB2的相互作用。

5、>　　實(shí)驗(yàn)室前期研究揭示L-periaxin可以通過(guò)其分子內(nèi)NLS2，3結(jié)構(gòu)域與酸性結(jié)構(gòu)域的相互作用形成首尾自環(huán)結(jié)構(gòu)，而DRP2與L-periaxin的NLS2，3的結(jié)合會(huì)減弱L-periaxin的分子內(nèi)的首尾相互作用。本文通過(guò)DRP2的干擾實(shí)驗(yàn)，體外NLS3多肽孵育施萬(wàn)細(xì)胞，結(jié)合雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)，揭示DRP2及NLS3合成多肽片段可以競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合L-periaxin的NLS結(jié)構(gòu)域，從而破壞L-periaxin之間的分子內(nèi)的相互作用，免

6、疫熒光定位揭示L-periaxin的分子由閉環(huán)到開(kāi)環(huán)的狀態(tài)改變，引起L-periaxin細(xì)胞膜定位數(shù)量的增加。
　　最后，為了檢測(cè)L-periaxin是否影響RSC96細(xì)胞的增殖，利用MTT法及流式細(xì)胞術(shù)對(duì)敲除L-periaxin及過(guò)表達(dá)L-periaxin后對(duì)RSC96細(xì)胞的增殖的影響進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示敲除了L-periaxin基因的細(xì)胞增殖速度減慢，G1期細(xì)胞的比例比正常細(xì)胞增加了18.16％， S期減少了20.62%。說(shuō)明