1、嗜熱菌是指一類(lèi)能夠在 55 ℃以上溫度下正常生長(zhǎng)和繁殖的細(xì)菌群體。本研究以嗜熱厭氧乙醇桿菌 Thermoanaerobacter ethanolicus JW 200 為研究對(duì)象，構(gòu)建嗜熱厭氧乙醇桿菌-大腸桿菌穿梭載體。
　　 嗜熱厭氧乙醇菌是一種專(zhuān)性厭氧、嗜高溫的革蘭氏陽(yáng)性菌，能廣泛地以廉價(jià)的淀粉、木聚糖等已糖和戊糖為底物進(jìn)行發(fā)酵，產(chǎn)生以乙醇為主的代謝產(chǎn)物。由于它具有工業(yè)生產(chǎn)乙醇的潛力，國(guó)際上對(duì)嗜熱厭氧乙醇菌菌株JW200與3

2、9E均有深人研究。但是該菌遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的缺少，制約了對(duì)該菌應(yīng)用領(lǐng)域和理論基礎(chǔ)的進(jìn)一步研究。
　　 本文先對(duì)已經(jīng)構(gòu)建好的穿梭質(zhì)粒 pTE16 進(jìn)行改造，通過(guò)替換篩選標(biāo)記上原有的啟動(dòng)子以期在嗜熱菌中能穩(wěn)定存在。再通過(guò)引入大腸桿菌的組成型啟動(dòng)子使該篩選標(biāo)記在大腸桿菌中發(fā)揮作用。在大腸桿菌中，對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行氯霉素抗性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果僅能在氯霉素濃度為 10μg/ml的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。同時(shí)，對(duì) pHsh 進(jìn)行改造，將其上的σ 70 專(zhuān)門(mén)識(shí)別的標(biāo)準(zhǔn)