鯉魚蛋白酶體激活因子PA28-β亞單位基因克隆、鑒定及時空轉錄分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、PA28-α和PA28-β可被IFN-γ誘導,可以激活20S蛋白酶體前體,使之產(chǎn)生抗原肽被MHC Ⅰ類分子識別呈遞給細胞毒性T細胞,因此在MHC Ⅰ類抗原呈遞中具有重要作用。編碼PA28-α和PA28-β的基因PMSE1和PMSE2已在哺乳動物中被很好的鑒定和闡述,而在魚類方面報道很少。本研究以熒光mRNA差異顯示技術獲得的含有鯉魚PA28-β亞單位cDNA3′端部分片段為核酸探針,地高辛標記后,應用核酸雜交法篩選有絲分裂原刺激的鯉魚外

2、周血白細胞cDNA文庫。此外,本研究根據(jù)PA28-β亞單位cDNA設計引物,應用半定量。RT-PCR方法,分析了在分離培養(yǎng)的正常白細胞和絲列原刺激的白細胞中該亞單位基因不同時間的轉錄差異情況,還對PA28-β在正常鯉魚和嗜水氣單胞菌Ahes01刺激后鯉魚的組織轉錄情況進行了分析。結果顯示:我們獲得的鯉魚PA28-β亞單位cDNA克隆全長1175bp,GenBank獲得注冊號為EU255233,含有5′非翻譯區(qū)和3′非翻譯區(qū)及3′poly

3、(A)加尾信號(AATAAA)和poly(A)尾巴,中間是732bp大小編碼244個氨基酸的開放閱讀框。推測的蛋白序列與斑馬魚、石首魚、比目魚、河豚、短尾猊、狗、獼猴、牛、人和非洲蟾蜍的PA28-β同源性分別為95%、78%、73%、70%、65%、63%、63%、63%、63%和55%,在相同的進化距離下比較哺乳動物和魚類,人、猩猩、豬、狗等哺乳動物保守序列比例約占70%,而魚類則相對較低,與哺乳動物比較約只有30%保守,說明魚類的分

4、子進化要比哺乳動物快,鯉魚與石首魚、比目魚、河豚相比,和斑馬魚的親緣關系更大,這可能是鯉魚和斑馬魚同屬淡水魚而石首魚、比目魚和河豚屬于海水魚的原因了。蛋白質(zhì)序列比對顯示鯉魚PA28-β蛋白序列中同樣含有KEKE基序、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜保留信號KPSM、典型的富含脯氨酸基序、可能的蛋白激酶C識別位點、高度保守的激活環(huán)和高度同源的C末端區(qū)域5個哺乳動物中存在的保守功能區(qū)域:時間轉錄分析顯示:絲裂原刺激白細胞中PA28-β轉錄增強,尤其是ConA刺激后

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