1、多年生黑麥草(LoliumperenneL.)、匍匐剪股穎(AgrostisstoloniferaL.)是國內外廣泛應用的重要冷季型草坪草之一，利用植物基因工程技術改良其抗蟲性對防治地下害蟲的危害，減少殺蟲劑的使用，保護環(huán)境，節(jié)約草坪維護費用具有重要的意義。本文對這兩種草坪草的組織培養(yǎng)與植株再生技術進行了研究。對于農桿菌介導的遺傳轉化技術進行了探索。經PCR方法檢測，已獲得轉cry8C基因剪股穎。其主要研究內容如下： (1)以多

2、年生黑麥草卡特、暢想種子為外植體，卡特在2,4-D濃度為9mg/L時，愈傷誘導率最高達到41.3％；暢想在2,4-D濃度為7mg/L時，愈傷誘導率最高達到33.3％；在7mg/L2,4-D時卡特胚性愈傷誘導率最高達到24.7％，暢想胚性愈傷誘導率最高達到18.7％。添加細胞分裂素TDZ對提高愈傷組織的誘導率有一定的作用，有助于改善愈傷組織狀態(tài)。以黑麥草胚軸為外植體，其愈傷誘導率低于成熟種子的誘導率。添加脯氨酸和水解酪蛋白可以提高胚性愈傷

3、誘導率。剪股穎南岸種子在6mg/L2,4-D和0.2mg/LTDZ培養(yǎng)基中誘導率最高達到68.1％，在5mg/L2,4-D、0.1mg/LTDZ時，胚性愈傷誘導率最高達到45.6％。 以繼代2個月的胚性愈傷組織進行分化，在0.3mg/LTDZ、0.7mg/L6-BA時黑麥草卡特的愈傷分化率最高達到31.7％；在0.5mg/LTDZ、0.5mg/L6-BA時，暢想的分化率最高達到26％。剪股穎南岸在0.3mg/LTDZ、0.5mg

4、/L6-BA時，愈傷分化率最高達到52.7％。繼代5個月后，卡特的愈傷分化率降到20.3％，暢想的愈傷分化率降到12.3％，南岸的愈傷分化率降到41.2％，作為遺傳轉化的受體材料，卡特和南岸的愈傷組織是比較合適的。 (2)分別將抗蟲基因cry8C置于Ubiquitin啟動子和煙草根部特異啟動子TobRB7的調控之下，構建成p30U8C和p30T8C兩個可在植物中表達的載體，并將其導入根癌農桿菌LBA4404。通過農桿菌的介導將U