1、目的：采用mRNA差異顯示反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(DDRT-PCR)篩選塔崗水庫(kù)淡水渦蟲(chóng)饑餓誘導(dǎo)中的差異表達(dá)序列標(biāo)簽(Express sequence tags，ESTs)，探索淡水渦蟲(chóng)抗饑餓生存的分子機(jī)理；對(duì)九產(chǎn)地淡水渦蟲(chóng)的Hsp70序列進(jìn)行分子系統(tǒng)學(xué)研究，對(duì)其系統(tǒng)演化關(guān)系進(jìn)行了初步探討。 方法：饑餓誘導(dǎo)塔崗水庫(kù)的淡水渦蟲(chóng)，在饑餓一個(gè)月時(shí)將其處死，提取總RNA，用mRNA差異顯示技術(shù)(DDRT-PCR)研究饑餓情況下差異表達(dá)

2、的基因，克隆與測(cè)序后用生物信息學(xué)方法對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析；克隆九產(chǎn)地淡水渦蟲(chóng)Hsp70基因序列，進(jìn)行分子系統(tǒng)學(xué)分析。 結(jié)果：運(yùn)用mRNA差別顯示技術(shù)篩選饑餓渦蟲(chóng)體內(nèi)的差別表達(dá)基因，獲得18條差異表達(dá)片段。6個(gè)為18srRNA，2個(gè)為28srRNA，1個(gè)為翻譯起始因子，1個(gè)為與日本三角渦蟲(chóng)信使mRNA上與DjClg3表達(dá)有關(guān)的CaspaSe-3基因，1個(gè)與日本三角渦蟲(chóng)DEAD box蛋白表達(dá)有關(guān)的信使mRNA同源序列，1個(gè)與Hsp7

3、0基因同源，1個(gè)與Hsp90基因同源，2個(gè)與Polaromonas藻JS666的基因組序列同源性最高，1個(gè)與Schmidtea mediterranea克隆H.67.8d的未知mRNA序列同源性最高，還有2個(gè)在Genbank中未找到同源序列。此外，我們還克隆了九個(gè)產(chǎn)地渦蟲(chóng)的Hsp70部分cDNA序列，并用分子進(jìn)化分析軟件Meg3.1軟件對(duì)其分析構(gòu)樹(shù)。九產(chǎn)地渦蟲(chóng)Hsp70親緣關(guān)系顯示：信陽(yáng)新縣農(nóng)科所、信陽(yáng)寨溝和信陽(yáng)息縣陳灣大橋下三地聚類(lèi)一

4、枝，親緣關(guān)系較近；南陽(yáng)淮源寺和南陽(yáng)桐柏均屬桐柏山區(qū)，聚為一個(gè)小枝；山西王莽嶺西部河錫崖村和山西王莽嶺錫崖溝下兩個(gè)產(chǎn)地同在王莽嶺風(fēng)景區(qū)內(nèi)，地理位置及環(huán)境都非常相似，聚為一個(gè)小枝：新鄉(xiāng)衛(wèi)輝塔崗水庫(kù)屬太行山區(qū)，但與王莽嶺兩地距離關(guān)系而言，相對(duì)較遠(yuǎn)，因此獨(dú)立為一枝；洛陽(yáng)白云山屬伏牛山系，地理位置上與前八個(gè)產(chǎn)地相對(duì)比較遠(yuǎn)，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，故也單獨(dú)為一枝。 結(jié)論：初步篩選出18個(gè)饑餓誘導(dǎo)的差異表達(dá)ESTs，為功能基因的克隆與分析奠定了基礎(chǔ)。九