1、目的：探討溺死大鼠死后不同時間點mRNA的變化及穩(wěn)定性，篩選穩(wěn)定的內(nèi)參基因，并定量水通道蛋白5（Aquaporin，AQP-5）mRNA的表達。
　　方法：選取30只無特定病原體（Specific pathogen Free，SPF）級健康成年SD（Sprague Dawley）大鼠，并按照隨機單位組設計分組法，以每組6只，隨機均勻分為對照組（脊椎脫臼法處死）、溺死15min組（溺死尸體置于水中15min），溺死4h組（溺死尸體置

2、于水中4h），溺死16h組（溺死尸體置于水中16h），溺死48h組（溺死尸體置于水中48h）。取溺死尸體及對照組尸體解剖，觀察肺臟變化，并分取肺組織，一部分用4％多聚甲醛（polyformaldehyde，PFA）中性PBS（phosphate buffer saline）液固定，用于形態(tài)學檢測；一部分液氮速凍，提取RNA，采用qPCR（Real Time PCR，實時熒光定量聚合酶鏈反應）篩選穩(wěn)定的內(nèi)參基因以及對AQP-5進行定量檢測

3、。
　　結果：與對照組比較，各溺死組大鼠肺部均呈嚴重水腫，一定程度破裂出血，并可感覺到明顯溺液存于肺臟。通過提取RNA，并行qPCR， geNorm和NormFinder排序篩選發(fā)現(xiàn)ACTB（β-Actin，β-肌動蛋白）為最穩(wěn)定的內(nèi)參基因；檢測AQP-5的表達我們發(fā)現(xiàn)溺死大鼠較對照組大鼠AQP-5相對表達量下降。
　　結論：篩選出 ACTB為最穩(wěn)定的內(nèi)參基因，各溺死時間點大鼠AQP-5 mRNA的表達均顯著下調(diào)。本研究中A