1、白念珠菌是臨床上最為重要的條件性致病真菌之一。由于免疫缺陷人群的不斷增加，白念珠菌引起的感染備受關注。在與宿主相互作用的過程中，白念珠菌進化出極為精細的形態(tài)發(fā)生及壓力應答系統(tǒng)，能夠有效定殖并抵御宿主免疫系統(tǒng)攻擊。磷脂酰肌醇衍生物是真核細胞極為重要的一類小分子物質，與細胞的信號轉導、生長代謝調節(jié)緊密相關。在釀酒酵母及許多哺乳動物細胞中，磷脂酰肌醇磷酸酶Sac1及其同源蛋白介導了磷脂酰肌醇一磷酸或磷脂酰肌醇二磷酸向磷脂酰肌醇的轉化，在肌動蛋

2、白組裝、細胞極性確立、細胞壁功能維持、胞吞與胞吐等過程中扮演重要角色。然而，白念珠菌的Sac1蛋白及其功能至今尚未明確。本研究即對白念珠菌的Sac1蛋白進行分子鑒定及功能分析。主要結果如下：
　?。?）通過BLASTP分析，從白念珠菌基因組數(shù)據(jù)庫中鑒定出一種與釀酒酵母ScSac1同源的蛋白，命名為Sac1。序列比對分析發(fā)現(xiàn)，該蛋白屬于SAC家族成員，具有保守的 CX5R(T/S)基序及 SAC結構域。通過構建白念珠菌 SAC1基因

3、在釀酒酵母中的回補菌株，發(fā)現(xiàn)該基因能夠回補釀酒酵母ScSAC1缺失造成的肌醇營養(yǎng)缺陷，提示白念珠菌Sac1蛋白參與了磷脂酰肌醇代謝。通過GFP定位技術，發(fā)現(xiàn)Sac1蛋白主要定位于內質網(wǎng)膜，提示該蛋白與內質網(wǎng)功能緊密相關。
　?。?）采用兩步PCR介導的同源重組法，構建白念珠菌SAC1基因的缺失菌株，在此基礎上構建回補菌株。采用固體點板實驗，發(fā)現(xiàn)SAC1基因的缺失造成白念珠菌對內質網(wǎng)壓力及細胞壁壓力藥物高度敏感；酸性磷酸酶分析實驗表

4、明， SAC1基因的缺失導致白念珠菌的糖基化能力發(fā)生缺陷；幾丁質染色及透射電鏡觀察結果顯示，該基因缺失導致細胞壁幾丁質分布與含量發(fā)生改變，以及細胞壁超顯微結構異常；采用GFP報告系統(tǒng)及實時定量PCR技術，發(fā)現(xiàn)該基因的缺失導致非折疊蛋白應答（UPR）基因及細胞壁完整性（CWI）基因表達的上調。上述結果表明Sac1蛋白在內質網(wǎng)及細胞壁完整性維持方面發(fā)揮重要作用。
　?。?）SAC1基因缺失導致白念珠菌菌絲發(fā)育能力降低，細胞僅能形成彎曲

5、的菌絲，提示sac1Δ/Δ缺失株菌絲的極性生長能力受阻。肌動蛋白染色及Hwp1定位分析表明，SAC1基因缺失導致肌動蛋白斑在菌絲頂端的定位發(fā)生紊亂，以及菌絲特異性蛋白的極性轉運過程存在缺陷，表明Sac1通過維持肌動蛋白骨架的頂端定位，調控菌絲特異性蛋白的極性轉運過程。
　?。?）SAC1基因缺失導致白念珠菌侵染宿主上皮細胞及耐受巨噬細胞攻擊的能力顯著下降，并且喪失了系統(tǒng)性感染小鼠的能力，表明Sac1與白念珠菌的毒力緊密相關，是一種