1、白念珠菌是人體的一種共生菌，在一定條件下可以轉(zhuǎn)變?yōu)橐环N致病菌，臨床調(diào)查表明白念珠菌已經(jīng)成為全球一種普遍流行的致病真菌。白念珠菌主要通過(guò)感染人體內(nèi)部臟腑以及血液致病。通過(guò)對(duì)白念珠菌相關(guān)文獻(xiàn)的查閱我們發(fā)現(xiàn)白念珠菌的致病性以及耐藥強(qiáng)度在逐年增強(qiáng)，其中熱休克蛋白90參與的白念珠菌pck1通路在提高白念珠菌的生長(zhǎng)速度以及增強(qiáng)對(duì)唑類等抗菌藥物的耐藥性方面有重要意義[1]。HSP90的輔助功能與其蛋白結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，尤其是N端和C端的部分關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)

2、對(duì)真菌HSP90的功能有重要作用[2]。我們通過(guò)蛋白質(zhì)軟件分析發(fā)現(xiàn)，白念珠菌HSP90與人源HSP90堿基序列同源性接近65％，而C端的差異性較大。這個(gè)發(fā)現(xiàn)為研發(fā)白念珠菌HSP90較高特異性抑制劑靶點(diǎn)提供了一定的理論依據(jù)?；趦烧咝蛄胁町惖南嚓P(guān)文獻(xiàn)以及軟件以及計(jì)算機(jī)軟件分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)白念珠菌中CaHSP90(1-673)以及CaHSP90(1-655)對(duì)于CaHSP90的二聚體形成可能會(huì)產(chǎn)生一定的影響，而其相對(duì)應(yīng)人源HSP90部分為hHS

3、P90(1-679)和hHSP90(1-696)，根據(jù)上述的認(rèn)識(shí)我們發(fā)現(xiàn)，通過(guò)研究白念珠菌HSP90與人體HSP90結(jié)構(gòu)差異去發(fā)現(xiàn)CaHSP90的特異性較高的耐藥靶點(diǎn)，從而提高白念珠菌的藥物敏感性。前期我們成功完成了體外質(zhì)粒的構(gòu)建，初期主要是通過(guò)酶切技術(shù)將SC5314實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)菌株的CaHSP90，CaHSP90(1-673)以及CaHSP90(1-655)的基因序列裝入PET22b質(zhì)粒中，中期我們通過(guò)在大腸桿菌胞內(nèi)表達(dá)，用His-鎳柱

4、蛋白純化技術(shù)純化了CaHSP90以及CaHSP90(1-673)，CaHSP90(1-655)，hHSP90以及hHSP90(1-679)，hHSP90(1-696)這些蛋白，后期我們用Superdex200蛋白制備分析柱等技術(shù)對(duì)CaHSP90，CaHSP90(1-673)以及CaHSP90(1-655)，HSP90以及hHSP90(1-679)，hHSP90(1-696)這些蛋白進(jìn)行了質(zhì)量計(jì)算和蛋白結(jié)構(gòu)功能的分析。我們還研究了CaHS

5、P90的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變化對(duì)于化學(xué)修飾的影響，最后我們進(jìn)行了HSP90，CaHSP90(1-673)以及CaHSP90(1-655)的ATPase活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。
　　結(jié)果:通過(guò)PCR技術(shù)和生物公司的測(cè)序證明我們?cè)隗w外成功構(gòu)建了相關(guān)質(zhì)粒，蛋白電泳結(jié)果顯示復(fù)制的質(zhì)粒能夠在大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞中成功表達(dá)。通過(guò)Superdex200制備柱我們發(fā)現(xiàn)CaHSP90(1-655)與hHSP90(1-679)存在結(jié)構(gòu)差異，CaHSP90(1-6