1、目的:觀察Nrf2/ARE通路在右美托咪定(DEX)預(yù)處理減輕大鼠肢體缺血再灌注損傷中的作用。
　　方法:
　　1.28只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為四組:假手術(shù)組（Sham組）、缺血再灌注組（I/R組）、I/R+右美托咪定預(yù)處理組（DEX組）、I/R+DEX+可替美唑組（Atip組）。
　　2.Atip組在麻醉后腹腔一次性給予Atip(250ug/kg)和DEX(25ug/kg)，Sham組和I/R組在麻醉后腹腔給予相應(yīng)

2、體積生理鹽水，DEX組給予相應(yīng)體積DEX和生理鹽水，30min后單側(cè)股部切口，無創(chuàng)動脈夾夾閉股動脈，側(cè)支循環(huán)用橡皮筋以恒定張力結(jié)扎，缺血3h后去除動脈夾及橡皮筋，開放2h。
　　3.取大鼠血清測乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK);取部分腓腸肌-80℃凍存，測量丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測胞核Nrf2、胞漿HO-1蛋白;另取部分腓腸肌多聚甲醛中保存，用作免疫組化檢測胞

3、核Nrf2、胞漿HO-1蛋白和光鏡觀察骨骼肌形態(tài);同時切取少量腓腸肌進(jìn)行濕干比檢測。
　　結(jié)果:
　　1.各組HE染色腓腸肌形態(tài)變化
　　骨骼肌橫切面觀察到:Sham組，肌纖維呈多邊形結(jié)構(gòu)規(guī)則排列，未見細(xì)胞腫脹，間質(zhì)結(jié)構(gòu)正常，血管周圍未見明顯炎癥細(xì)胞滲出;與Sham組比較，I/R、Atip組，細(xì)胞排列不規(guī)則，染色明顯變淡、界限不清晰，細(xì)胞腫脹明顯，間質(zhì)見彌散的紅細(xì)胞，血管周圍可見大量炎癥細(xì)胞浸潤，該兩組未見明顯差異;D

4、EX組，細(xì)胞排列欠規(guī)則，細(xì)胞染色稍有變淡、界限欠清晰，間質(zhì)偶見紅細(xì)胞，血管周圍有少量炎性細(xì)胞浸潤，但與I/R組相比有明顯好轉(zhuǎn)。
　　2.各組骨骼肌濕/干重的比值
　　Sham組濕干重比值較小;與Sham組比較，I/R組骨骼肌濕干重比值明顯升高（P＜0.01）;與I/R組比較，DEX組濕干重比值降低（P＜0.05）;與DEX組比較，Atip組濕干重比值升高（P＜0.05）。
　　3.各組大鼠骨骼肌MDA結(jié)果
　　與

5、Sham組比較，I/R組MDA水平明顯升高(P＜0.01);與I/R組比較，DEX組MDA水平顯著降低（P＜0.01）;與DEX組比較，Atip組MDA水平升高（P＜0.05）。
　　4.各組大鼠骨骼肌SOD結(jié)果
　　與Sham組相比，I/R組SOD酶活性顯著降低(P＜0.01);與I/R組相比，DEX組SOD酶活性升高（P＜0.01）;與DEX組相比，Atip組SOD活力降低(P＜0.05)。
　　5.各組血清LDH

6、、CK結(jié)果
　　與Sham組比較，I/R組LDH、CK水平顯著升高(P＜0.01);與I/R組比較，DEX組LDH、CK水平明顯降低(P＜0.05);與DEX組比較，Atip組LDH、CK水平升高（P＜0.05）。
　　6.WB檢測骨骼肌Nrf2和HO-1蛋白的表達(dá)
　　Sham組胞核Nrf2、胞漿HO-1電泳條帶吸光度(A)值與內(nèi)參TBP、β-actin電泳條帶吸光度(A)值的比值較小;與Sham組比較，I/R組胞核

7、Nrf2、胞漿HO-1吸光度(A)值與內(nèi)參吸光度(A)值的比值升高（P＜0.05）;與I/R組比較，DEX組胞核Nrf2、胞漿HO-1吸光度(A)值與內(nèi)參吸光度(A)值的比值顯著升高（P＜0.01）;與DEX組比較，Atip組胞核Nrf2、胞漿HO-1吸光度(A)值與內(nèi)參吸光度(A)值的比值明顯降低（P＜0.05）。
　　7.免疫組化檢測骨骼肌Nrf2和HO-1蛋白的表達(dá)
　　免疫組化光鏡下顯示:Sham組Nrf2及HO-1