順鉑通過激活自噬信號通路抑制乳腺癌細胞生長的機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:自噬(Autophagy)被稱為Ⅱ型細胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)?;熓侨橄侔┑闹饕委熓侄沃唬欢允墒欠駞⑴c其中,目前尚不完全清楚。本研究擬探討化療藥物是否能通過自噬途徑抑制乳腺癌細胞的生長。
  方法:1.表阿霉素(EPI)、甲氨蝶呤(MTX)、環(huán)磷酰胺(CTX)、順鉑(DDP)處理乳腺癌細胞后,檢測其增殖能力、細胞周期、自噬相關基因mRNA的表達。
  2.建立穩(wěn)定表達

2、DsRed-LC3細胞株,分別用表阿霉素(EPI)、甲氨蝶呤(MTX),環(huán)磷酰胺(CTX)、順鉑(DDP)處理,檢測自噬小體的形成。
  3.通過自噬抑制劑(3-methyladenine,3-MA)阻斷自噬通路,再用表阿霉素(EPI)、甲氨蝶呤(MTX)、環(huán)磷酰胺(CTX)、順鉑(DDP)處理乳腺癌細胞,檢測其增殖能力。
  4.分別用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT法)、流式細胞術、實時熒光定量PCR、熒光顯微鏡檢測乳腺癌細

3、胞的增殖能力、細胞周期、自噬基因 mRNA的表達水平、自噬體形成。
  結果:
  1.表阿霉素,甲氨蝶呤,環(huán)磷酰胺和順鉑抑制乳腺癌細胞系MDA-MB-231和MDA-MB-453細胞增殖能力,并呈劑量和時間依賴效應。
  2.表阿霉素,甲氨蝶呤,環(huán)磷酰胺和順鉑中,僅順鉑可以誘導乳腺癌細胞MDA-MB-231和MDA-MB-453發(fā)生自噬。
  3.自噬抑制劑(3-methyladenine,3-MA)處理后,可

4、削弱順鉑對乳腺癌細胞系MDA-MB-231和MDA-MB-453抑制增殖的能力,而對表阿霉素,甲氨蝶呤和環(huán)磷酰胺的抑生長作用無明顯影響。
  4.順鉑誘導乳腺癌細胞發(fā)生G2/M細胞周期阻滯。自噬抑制劑(3-methyladenine,3-MA)不能削弱化療藥物對細胞周期的影響。
  5.順鉑可以上調自噬相關基因mRNA的表達,包括AMBRA1,ATG3,ATG4C,ATG4D,ATG5,,ATG7,ATG13,ATG14,A

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