1、無瓣海桑(Sonneratia apetala Buch.-Ham)，是紅樹林中優(yōu)良喬木樹種之一，天然分布于印度、孟加拉等國(guó)鹽度較低的泥質(zhì)灘涂，1985年我國(guó)首次將無瓣海桑在海南東寨港引種成功。由于無瓣海桑在速生性、抗逆性、耐寒性、防風(fēng)御浪等方面明顯優(yōu)于其他紅樹林樹種，其引種范圍逐漸北擴(kuò)，并成為華南沿海防護(hù)林體系建設(shè)中的優(yōu)良樹種之一。無瓣海桑的豐富遺傳多樣性決定其廣泛的生態(tài)適應(yīng)，但對(duì)無瓣海桑的群體遺傳多樣性的研究還有待深入，特別是分子標(biāo)

2、記的應(yīng)用還不多見。SSR(simple sequence repeat，簡(jiǎn)單重復(fù)序列)分子標(biāo)記因其在真核生物基因組中含量豐富、多態(tài)性高、共顯性特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于遺傳多樣性、遺傳圖譜的構(gòu)建等方面。目前無瓣海桑尚缺乏SSR標(biāo)記。
　　 基于ISSR-PCR的5'錨定技術(shù)開發(fā)SSR標(biāo)記操作簡(jiǎn)單，對(duì)于基因組信息缺乏的物種來說，5'錨定PCR技術(shù)是一種開發(fā)SSR標(biāo)記的有效的方法。本研究主要應(yīng)用5'錨定PCR技術(shù)，通過構(gòu)建基因組文庫分離了無瓣

3、海桑的微衛(wèi)星序列。共設(shè)計(jì)了含有四類重復(fù)基元(AC、CA、CT和GA)的4組錨定簡(jiǎn)并引物以無瓣海桑基因組DNA為模板擴(kuò)增SSR區(qū)域，擴(kuò)增出DNA片段回收、連接、轉(zhuǎn)化后形成4個(gè)基因組SSR文庫，挑選陽性克隆測(cè)序，根據(jù)測(cè)序結(jié)果設(shè)計(jì)SSR引物?？偣矞y(cè)序的克隆片段有94個(gè)，得到兩端含有SSR基元的序列90個(gè)，其中的30個(gè)為冗余序列，最終得到了60個(gè)兩端含有SSR的單克隆序列，冗余率為32.0％。大部分克隆片段的SSR序列較短，平均重復(fù)數(shù)為8.32

4、。GA/CT基元平均重復(fù)數(shù)最大為10.25，TG/AC基元平均重復(fù)數(shù)最小為7.10。
　　 根據(jù)重復(fù)序列大于10的克隆片段設(shè)計(jì)出37對(duì)特異引物，以采自海南東寨港第一批引種至今成活的15株無瓣海?；蚪MDNA為模板，篩選出30對(duì)穩(wěn)定擴(kuò)增的特異引物。這些穩(wěn)定擴(kuò)增的引物中11對(duì)表現(xiàn)為單位點(diǎn)擴(kuò)增，19對(duì)為多位點(diǎn)擴(kuò)增。穩(wěn)定擴(kuò)增的引物中5對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物表現(xiàn)出明顯多態(tài)性，SSR位點(diǎn)等位基因最大值為3，平均等位基因2.4。
　　 本研究利用