1、光皮樺為我國(guó)特有的優(yōu)良用材樹(shù)種,系樺木科（Betulaceae）樺木屬（Betula）落葉喬木。光皮樺具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和廣泛的用途,其材質(zhì)優(yōu)良,木材堅(jiān)硬,已被國(guó)家列入一類(lèi)材。光皮樺作為一種優(yōu)良的速生闊葉樹(shù)種,對(duì)于發(fā)展山區(qū)經(jīng)濟(jì),調(diào)整林分結(jié)構(gòu),改善生態(tài)環(huán)境都有十分重要的意義。本文從光皮樺EST(ExpressedSequenceTags,EST)序列開(kāi)發(fā)出微衛(wèi)星標(biāo)記,并應(yīng)用于光皮樺遺傳多樣性分析和遺傳圖譜的構(gòu)建。
　　 光皮樺轉(zhuǎn)錄

2、組隨機(jī)測(cè)序獲得53799條序列,通過(guò)序列前處理和聚類(lèi)拼接后得到37662條,共計(jì)1687.3kb的無(wú)冗余Unigene。對(duì)處理后的ESTs進(jìn)行微衛(wèi)星搜索,共搜索到4419個(gè)SSRs,分布于3692條ESTs中,平均每3.8kb出現(xiàn)一個(gè)SSR位點(diǎn),SSR出現(xiàn)的頻率是11.73％。五種重復(fù)類(lèi)型中主要是三核苷酸重復(fù),占所有SSRs的50.03％;但含量最豐富的SSR重復(fù)類(lèi)型是AG/TC二核苷酸重復(fù)類(lèi)型,占總SSR位點(diǎn)數(shù)的11.00％,而三核苷

3、酸重復(fù)中出現(xiàn)頻率較高的是CTT/GAA,只占總SSR位點(diǎn)數(shù)的5.45％。本文還依據(jù)搜索出的SSRs設(shè)計(jì)了引物,共獲得引物3085對(duì)。
　　 采用正交設(shè)計(jì)L25(56)優(yōu)化EST-SSRPCR反應(yīng)體系,確定最佳PCR反應(yīng)體系為DNA模板濃度4ng·μL-1,引物濃度0.500μmol·L-1,Mg2+1.25mmol·L-1,dNTPs0.250mmol·L-1,Taq酶0.0725U·μL-1。通過(guò)梯度PCR試驗(yàn)篩選得到相應(yīng)引物

4、的最佳退火溫度。對(duì)優(yōu)化出的EST-SSRPCR反應(yīng)體系進(jìn)行穩(wěn)定性檢測(cè),結(jié)果均能獲得穩(wěn)定、清晰可辨的DNA譜帶。
　　 選擇其中SSR大于16bp的引物308對(duì)在公司合成,先用8個(gè)無(wú)性系個(gè)體進(jìn)行多態(tài)性初篩,260對(duì)引物有擴(kuò)增產(chǎn)物,其中131對(duì)具有多態(tài)性。再選擇其中60對(duì)高多態(tài)性的EST-SSR引物對(duì)光皮樺育種群體77個(gè)無(wú)性系進(jìn)行遺傳多樣性分析,結(jié)果顯示此育種群體內(nèi)的遺傳差異與天然群體相近,同時(shí)UPGMA法聚類(lèi)顯示不同的光皮樺無(wú)性系