1、在大腸桿菌中分泌型表達重組人生長激素既有利于消除其在臨床應(yīng)用上的抗原性又有利于提取純化，因此在重組人生長激素的大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)中越來越受到青睞。本研究應(yīng)用T7啟動子與ompA3引導(dǎo)序列構(gòu)建了高效分泌型表達重組人生長激素工程菌pET-ompA3-hGH/BL21(DE3)，在搖瓶水平上，采用多因素正交優(yōu)選法初步篩選培養(yǎng)基成分，進而考察葡萄糖對重組人生長激素表達量的影響。在此培養(yǎng)基基礎(chǔ)上優(yōu)化誘導(dǎo)表達條件，分別考察了誘導(dǎo)起始菌密度、誘導(dǎo)溫度、誘

2、導(dǎo)劑濃度和誘導(dǎo)表達時間對重組人生長激素表達量的影響。在搖瓶水平優(yōu)化后進一步考察了工程菌在發(fā)酵罐水平目的蛋白的表達情況。在5L發(fā)酵罐中將工程菌pET-ompA3-hGH/BL21(DE3)進行補料式發(fā)酵，誘導(dǎo)表達分泌型重組人生長激素。通過對發(fā)酵培養(yǎng)基成分、補料成分、補料體積、補料時機和滴加流速的選擇，分泌表達重組人生長激素的量可達到250mg/L，占周質(zhì)蛋白的44％～54％，發(fā)酵周期縮短為8小時。用rhGH純蛋白免疫動物制備的多克隆抗體制