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![運用Padlock探針和LAMP技術檢測瓜類細菌性角斑病菌.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/11/8/06c4d208-08db-4bcf-b66e-82a7f63d4747/06c4d208-08db-4bcf-b66e-82a7f63d47471.gif)
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文檔簡介
1、丁香假單胞菌黃瓜致病變種(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)引起的黃瓜細菌性角斑病在世界范圍內皆有發(fā)生,造成不同程度的損失,同時也引起甜瓜細菌性葉斑病,是一種種傳病害。近年來在中國逐漸發(fā)展嚴重,危害嚴重時會造成嚴重減產(chǎn)。所以建立高效,快捷,操作簡單的檢測技術是防止此病原菌傳播的有效手段。
瓜類細菌性果斑病(bacterial fruit blotch)的病原菌為西瓜嗜酸菌(Acidovora
2、xcitrulli),是一種危害西瓜和甜瓜的世界檢疫性種傳病害。丁香假單胞黃瓜致病變種和西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli)和在甜瓜上的發(fā)病癥狀很相似,很難用肉眼和傳統(tǒng)的檢驗檢疫方法將兩者區(qū)分。
本研究運用Padlock探針和LAMP兩種檢測方法,設計了針對丁香假單胞菌黃瓜致病變種甜瓜株系的特異性探針和LAMP,針對黃瓜株系的特異性探針和LAMP。同時進行了特異性驗證,靈敏度驗證,模擬種子帶菌檢測和實際樣品檢測
3、。并將探針與Macroarray技術結合進行了病原菌的高通量檢測。實驗結果表明:這2條探針和2套LAMP均能把所有的參試菌株的這兩個株系的菌株彼此區(qū)分。模擬種子帶菌檢測率都能達到0.1%(1/1000),將探針與Macroarray技術結合進行實際樣品檢測,對市售的甜瓜種子和黃瓜種子進行檢測,從205份市售甜瓜種子檢測到7份種子帶菌,而19份市售的黃瓜種子沒有檢測到帶菌信號。Padlock探針和LAMP的靈敏度最高達到100fg/μL。
4、
本研究在丁香假單胞菌黃瓜致病變種甜瓜株系設計的Padlock探針和LAMP,能較好地將丁香假單胞黃瓜致病變種甜瓜株系和西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli)區(qū)分,為檢測瓜類細菌性果斑病提供了更多的方法。
同時在丁香假單胞菌黃瓜致病變種黃瓜株系和甜瓜株系設計的Padlock探針和LAMP,均能把所有參試的這兩個株系的菌株彼此區(qū)分。建立了丁香假單胞菌黃瓜致病變種的高通量檢測,通過將探針與Macroarra
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