大豆γ-生育酚甲基轉(zhuǎn)移酶(γ-TMT)基因的分離及功能分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、生育酚又稱維生素E,是僅由光合生物合成的一類脂溶性的強抗氧化劑,為人體所必需的維生素之一,它可以清除生物體內(nèi)的活性氧和自由基,具有明顯的抗逆作用。在天然存在的四種生育酚中,α-生育酚的生物活性最高且被人體優(yōu)先吸收和利用,但大多數(shù)主要的植物中α-生育酚水平普遍比較低,而γ-生育酚的水平卻比較高。γ-生育酚甲基轉(zhuǎn)移酶的作用是催化γ-生育酚轉(zhuǎn)化為α-生育酚。為了提高植物中α-生育酚的含量,我們進行了大豆γ-生育酚甲基轉(zhuǎn)移酶基因的分離,獲得全長

2、cDNA序列(命名為GMTMT),并將其轉(zhuǎn)化擬南芥,以及高維生素E的擬南芥是否可以增強抵抗病原菌丁香假單胞菌番茄致病變種(Pseudomonassyringaepv.tomato)的侵染實驗,得到以下結(jié)果:1.從大豆中分離了γ-生育酚甲基轉(zhuǎn)移酶的全長cDNA序列,并構(gòu)建了原核表達載體PET-TMT和植物表達載體PBI121-TMT,分別將其轉(zhuǎn)入大腸桿菌和擬南芥中,并獲得了比較高的體外酶活以及純系轉(zhuǎn)基因擬南芥1[#]、5[#]、7[#]、

3、8[#],ELISA檢測表明,1[#]GMTMT基因在轉(zhuǎn)基因擬南芥中表達活性最高,HPLC分析表明,轉(zhuǎn)基因植株的α-生育酚含量普遍高于野生型植株,提高3-6倍。 2.以轉(zhuǎn)基因擬南芥純系植株1[#]、5[#]、7[#]和野生擬南芥為研究對象,采用注射法對轉(zhuǎn)基因擬南芥純系植株和野生擬南芥進行丁香假單胞菌番茄致病變種P.syringaepv.tomatoDC3000的的侵染實驗,結(jié)果顯示,接種病原菌三天后,轉(zhuǎn)基因純系植株和野生型均出

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