1、目的：
　　鎘(Cadmium)是一種常見(jiàn)的有毒重金屬，人群可通過(guò)工業(yè)污染、飲水、食物和吸煙等途徑暴露于鎘。雄性生殖系統(tǒng)是鎘毒性重要靶點(diǎn)，其可通過(guò)引起睪丸細(xì)胞和生殖細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激導(dǎo)致男性發(fā)生不育。此外，研究表明組蛋白甲基化修飾在生精過(guò)程中發(fā)揮重要的作用，G9a介導(dǎo)的H3K9的單甲基化(H3K9mel)與雙甲基化(H3K9me2)與雄性生殖系統(tǒng)的正常生理過(guò)程密切相關(guān)。然而，G9a介導(dǎo)的組蛋白甲基化在鎘引起的雄性生殖系統(tǒng)毒性的具體作

2、用知之甚少，而且相關(guān)機(jī)制尚不清楚。
　　內(nèi)容：
　?、賹?周齡的雄性C57BL/6J小鼠經(jīng)腹腔注射暴露于2 mg/kg bw/day的鎘，暴露1天，3天和5天。采用H&E染色檢測(cè)小鼠附睪尾部和生精上皮的組織形態(tài)學(xué)改變，采用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶脫氧尿苷三磷酸切口末端標(biāo)記（TUNEL）和半胱天冬酶3(caspase-3)，PARP, Bax和Bcl-2的表達(dá)水平評(píng)價(jià)睪丸細(xì)胞凋亡。此外，將經(jīng)過(guò)鎘暴露的雄性小鼠飼養(yǎng)至8周齡后，采用計(jì)

3、算機(jī)輔助精子分析(CASA)檢測(cè)精液密度，采用雌鼠的受孕率以及受孕雌鼠的胎仔數(shù)評(píng)價(jià)雄鼠的生育能力。
　?、跒檫M(jìn)一步明確G9a介導(dǎo)的組蛋白甲基化在鎘暴露導(dǎo)致的睪丸細(xì)胞凋亡和生育能力損傷過(guò)程中的具體作用，我們將3周齡的雄性C57BL/6J小鼠經(jīng)腹腔注射暴露于2mg/kg bw/day的鎘，暴露時(shí)間為1天，3天和5天。處理完成后，通過(guò)免疫熒光技術(shù)和蛋白免疫印跡技術(shù)檢測(cè)小鼠睪丸細(xì)胞內(nèi)G9a，H3K9mel和H3K9me2的表達(dá)水平。采用B

4、IX-01294預(yù)處理來(lái)評(píng)價(jià)BIX-01294對(duì)鎘暴露后雄性小鼠生殖系統(tǒng)的保護(hù)作用。處理完畢后，通過(guò)免疫熒光技術(shù)和蛋白免疫印跡技術(shù)檢測(cè)小鼠睪丸細(xì)胞內(nèi)組蛋白甲基化水平和睪丸細(xì)胞的凋亡水平，此外，末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶脫氧尿苷三磷酸切口末端標(biāo)記（TUNEL）用于評(píng)價(jià)睪丸細(xì)胞的凋亡。將暴露完畢后的小鼠飼養(yǎng)至8周齡后，檢測(cè)小鼠的精液密度和生殖力。
　　結(jié)果：
　?、俦狙芯堪l(fā)現(xiàn)鎘暴露3天和5天后，雌鼠的受孕率以及受孕雌鼠的胎仔數(shù)顯著降低

5、。此外，鎘暴露導(dǎo)致雄鼠睪丸結(jié)構(gòu)異常，伴隨著睪丸生殖損傷評(píng)分的升高。TUNEL染色陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)升高，且caspase3，PARP和Bax的表達(dá)水平的升高，而B(niǎo)cl-2表達(dá)水平明顯下降。
　?、? mg/kg bw/day的鎘處理雄性小鼠后，睪丸細(xì)胞內(nèi)G9a，H3K9mel和H3K9me2的表達(dá)水平均明顯升高。BIX-01294預(yù)處理后能顯著減輕鎘暴露引起的組蛋白修飾的改變以及睪丸細(xì)胞凋亡。此外，BIX-01294預(yù)處理后能顯著升高鎘

6、暴露導(dǎo)致的精液密度下降和睪丸結(jié)構(gòu)異常，且能明顯升高鎘暴露引起的小鼠精液密度下降以及生殖能力損傷。
　　結(jié)論：
　　本實(shí)驗(yàn)證明，青春期鎘暴露能導(dǎo)致成年小鼠生育能力的下降，伴隨著雌鼠的受孕率以及受孕雌鼠的胎仔數(shù)明顯降低，精液密度、附睪重量與相對(duì)附睪重量的明顯下降。在此過(guò)程中，睪丸細(xì)胞內(nèi)G9a介導(dǎo)的H3K9mel和H3K9me2的表達(dá)水平升高和睪丸細(xì)胞凋亡。使用G9a的抑制劑BIX-01294預(yù)處理后能明顯減輕鎘暴露引起的雄性生殖