1、目的：利用虛擬篩選結合活性實驗，發(fā)現全新結構且具有較高活性和選擇性的A2A受體小分子拮抗劑，并初步探討拮抗劑在大鼠僵住癥模型上的效果。
　　方法：培養(yǎng)A2A受體穩(wěn)定轉染的HEK293細胞，收集細胞后勻漿裂解，低速離心去除核及未裂解的細胞，超高速離心收集細胞質膜成分，測定濃度后取50~70μg/管采用放射性配基結合實驗法測定；同樣，培養(yǎng)A1受體穩(wěn)定轉染的HEK293細胞，同法收集細胞質膜成分，測定濃度后取30~50μg/管測定；篩選

2、時，先用100μM化合物初篩，初篩使用兩副孔，重復一次。初篩后選擇抑制率大于80％的化合物進行復篩，復篩做化合物濃度-特異性結合曲線，化合物濃度范圍為100μM~1nM/0.1nM，每濃度使用兩副孔，從曲線中通過GraphPad Prism計算得到Ki及IC50，重復一次。通過放射性配基結合實驗篩選，確認對A2A具有親和力，且相對于A1而言有選擇性的化合物，進行細胞的功能性評價。功能性評價選用離心收集的A2A-HEK-293活細胞，將終

3、濃度范圍為100μM~1 nM/0.1 nM的化合物，加入激動劑預先處理的平衡緩沖液混懸的細胞中，通過測定cAMP來確證其拮抗活性。最后，優(yōu)選活性較好的A2A受體小分子拮抗劑進行體內動物實驗，使用氟哌啶醇誘導的僵直大鼠來進行小分子拮抗劑的體內抗PD作用的研究。
　　結果：在第一批次篩選的化合物中，選取兩個Ki小于1μM的化合物進行功能及抗PD活性測定，證明其A2A受體拮抗活性及抗PD活性良好；在此基礎上，再選取這兩個化合物的32個