水稻細胞壁降解過程中的多糖變化及OsCslF6基因的遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一章水稻細胞壁降解過程中的多糖變化
  降低木質(zhì)纖維素轉(zhuǎn)化可再生的燃料成本的首要障礙在于植物的抗降解能力,即細胞壁受到化學處理和酶解時所產(chǎn)生的抵抗力。當前,細胞壁抗體工具庫是足夠大而廣泛的,通過抗體對抗原的特異性結(jié)合,能夠檢測植物細胞壁多糖的主要種類的表位。本研究通過讓細胞壁多糖導向的單克隆抗體作為探針來具體分析細胞壁經(jīng)過預處理及酶解過程中細胞壁纖維素、半纖維素、果膠多糖的結(jié)構(gòu)變化,結(jié)合吸光度法己糖、戊糖、糖醛酸以及氣相質(zhì)譜測定

2、半纖維素單糖含量的變化,揭示細胞壁各組分之間的聯(lián)系。
  主要結(jié)果如下:
  1.堿預處理對纖維素的作用不明顯,而酸預處理卻能去除部分纖維素,與直接酶解的相比,預處理后酶解對纖維素的作用更加顯著。酸堿預處理酶解都能夠完全去除半纖維素和果膠的表位,說明酸堿預處理酶解對初生壁降解作用明顯。
  2.直接酶解只能夠去除木葡聚糖的表位,同時也能夠揭示在薄壁組織中掩蓋的木聚糖,而對果膠的表位并沒有明顯作用。
  3.在細胞

3、壁的降解過程中,薄壁組織最先被降解,韌皮部隨后被降解,除韌皮部外的維管束是最后被降解的組織。
  4.在細胞壁的降解過程中,果膠是首先被去除的細胞壁成分,其次是木葡聚糖,最后是木聚糖,說明木聚糖的抗降解能力強于果膠以及木葡聚糖。
  5.結(jié)合單糖釋放量以及己糖、戊糖的釋放量,相比較于野生型日本晴材料(NPB),Osfc16材料在酸、堿預處理下都有更高的酶解效率,兩個材料的戊糖、己糖及糖醛酸釋放量趨勢基本一致。
  第二

4、章 OsCslF6基因的遺傳轉(zhuǎn)化研究
  混合糖苷鍵葡聚糖(MLG)是禾本科細胞壁半纖維素的重要成分。由于MLG含量的高低對人類膳食纖維的營養(yǎng)健康、生產(chǎn)生物乙醇可發(fā)酵的多糖、在啤酒釀造過程密切相關, MLG的合成機制受到大量的關注。MLG合成基因大多屬于在糖基轉(zhuǎn)移酶(glycotransferease,GT)家族中的纖維素合酶(CesA like,CSL)超家族中,其中CslF家族和CslH家族是兩個禾本科特定的亞家族,有研究表明

5、它們參與MLG的生物合成。在水稻中,CslF和CslH家族分別含有8個成員和3個成員,已有研究表明,CslF6基因是MLG合成中最重要的一個基因。本文就水稻CslF6基因功能進行了初步研究,主要結(jié)果如下:
  1.構(gòu)建了不同熒光蛋白標簽(GFP和mCherry)OsCslF6基因超表達載體和互補載體,通過農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)入水稻和擬南芥,篩選陽性轉(zhuǎn)基因材料。這些材料將在后續(xù)研究中進行水稻細胞壁半纖維素MLG的含量、結(jié)構(gòu)的分析,為進一步了

6、解OsCslF6在水稻MLG合成中的功能提供了材料基礎。
  2.提取T0代OsCslF6超表達轉(zhuǎn)基因水稻葉片的膜蛋白,通過GFP抗體,檢測到的較弱的具有OsCslF6蛋白的條帶,支持OsCslF6基因在質(zhì)膜上調(diào)控MLG合酶的合成。
  3通過把35S啟動子以及自身啟動子的OsCslF6基因載體農(nóng)桿菌介導的轉(zhuǎn)基因方法轉(zhuǎn)入擬南芥,通過qRT-PCR分析擬南芥轉(zhuǎn)基因植株的基因表達。與野生型相比,OsCslF6超表達轉(zhuǎn)基因植株株高

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