1、目的：
　　研究17β-雌二醇（E2）是否可以激活人軟骨細(xì)胞中哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號(hào)通路，以及如何激活或通過(guò)什么樣的途徑激活mTOR信號(hào)通路。通過(guò)對(duì)這一新的分子機(jī)制的探索可能揭示雌二醇對(duì)人軟骨細(xì)胞的生理作用。我們的研究可能為mTOR作為OA治療的潛在靶點(diǎn)提供依據(jù)及對(duì)mTOR有效的抑制劑的研究提供參考。
　　方法：
　　對(duì)人永生化軟骨細(xì)胞細(xì)胞系TC28a2和C28/I2E2在雷帕霉素（mTOR抑制劑）、E

2、2、LY294002（PI3K抑制劑）、或E2與雷帕霉素或LY294002等聯(lián)合治療條件下進(jìn)行孵育。然后，對(duì)S6K1、p-S6K1蛋白、蛋白激酶B（AKT），和p-AKT的蛋白水平進(jìn)行Western blot分析，MMP3或MMP13的mRNA水平進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）、免疫共沉淀（CO-IP）和蛋白質(zhì)印跡法(WB)分析以驗(yàn)證雌激素受體α和mTOR信號(hào)通路之間的相互作用。
　　結(jié)果：
　　p-S6K1

3、和p-AKT（半小時(shí)和一小時(shí)）在與E2一起培養(yǎng)的細(xì)胞系TC28a2和C28/12E2中均明顯升高。mTOR不影響p-AKT的水平，但當(dāng)與LY294002（PI3K抑制劑）、或E2與LY294002組合的條件下培養(yǎng)，其水平明顯減少。當(dāng)與LY294002一起培養(yǎng)的條件下p-S6K1水平明顯減少，但這種影響可由E2與LY294002組合條件下逆轉(zhuǎn)。在與E2一起培養(yǎng)的條件下兔抗mTOR抗體可以與ERα發(fā)生共沉淀反應(yīng)。另外，E2可以通過(guò)mTOR信