1、該文從以下幾方面研究葡萄糖與胰島素對小鼠ob基因表達調(diào)控的特點及其機制,以便深入研究能量平衡及肥胖發(fā)生的機制,為防治肥胖提供理論依據(jù);一、葡萄糖和胰島素對3T3脂肪細胞中Leptin表達的調(diào)節(jié);為了解葡萄糖與胰島素對3T3脂肪細胞中Leptin表達的調(diào)節(jié),應(yīng)用RT-PCR方法,以β-actin為內(nèi)對照對不同葡萄糖和/或胰島素濃度培養(yǎng)條件下3T3脂肪細胞中Leptin mRNA表達水平進行相對定量分析.二、小鼠ob基因啟動子中葡萄糖和胰島

2、素 反應(yīng)元件的研究;為了解葡萄糖和胰島素調(diào)控小鼠ob基;因表達調(diào)控的機制,應(yīng)用Luciferase報告基因,GelMobility Shift Assays(GMSA),DNase I Footprint Assays和突變分析技術(shù)對小鼠ob基因啟動子中葡萄糖反應(yīng)元件(GLRE, Glucose-responsive Element)和胰島素反應(yīng)元件(IRE, Insulin-responsive Element)進行了研究.三、小鼠體

3、內(nèi)ob基因啟動子中GLRE/IRE差異分析;為了解小鼠體內(nèi)GLRE/IRE序列及其與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的差異,應(yīng)用PCR-SSCP 和DNA序列 分析技術(shù)對比分析了BALB/c小鼠與C57BL/6J小鼠ob基因啟動子中含GLRE/IRE的300bp(-1746bp/1445bp)區(qū)段的DNA序列,同時應(yīng)用Gel Mobility Shift Assays(GMSA)對兩品 系小鼠禁食16小時或禁食15小時再給予食物1時候后附睪脂肪細胞核蛋白與