1、背景及目的：
　　 5'-單磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)和磷酸肌醇3-激酶(PI3K)的信號通路在胰島素抵抗及細(xì)胞凋亡中都起到十分重要的作用。它們影響葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4(GLUT4)的表達(dá)和轉(zhuǎn)位以及細(xì)胞的凋亡。而10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因(PTEN)是PI3K/Akt通路的重要調(diào)節(jié)器。同時，PTEN可能也是AMPK的一個下游調(diào)節(jié)器。在本研究中，我們利用葡萄糖胺誘導(dǎo)骨骼肌細(xì)胞建立胰島素抵抗模型，通過對葡萄糖胺

2、誘導(dǎo)骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗模型及對其應(yīng)用PTEN的抑制劑BPV及AMPK激動劑二甲雙胍處理，研究PTEN在胰島素抵抗中的作用及對細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法：
　　 我們通過進(jìn)行反復(fù)試驗，應(yīng)用葡萄糖胺對大鼠骨骼肌細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)，制造胰島素抵抗模型。在成功建立葡萄糖胺誘導(dǎo)的骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗模型后，對葡萄糖胺誘導(dǎo)的骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗模型分別應(yīng)用PTEN的抑制劑BPV及AMPK激動劑二甲雙胍進(jìn)行處理。實驗分為4組:正常對照組

3、，葡萄糖胺組，二甲雙胍組及BPV組。利用氧化酶法檢測各組胰島素刺激前后葡萄糖變化及得到葡萄糖攝取率，通過Western Blotting檢測PTEN，P-PTEN和Akt蛋白的表達(dá)，利用免疫熒光方法檢測GLUT4轉(zhuǎn)位變化，以及通過AV-PI雙染測定細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié)果：
　　 葡萄糖胺誘導(dǎo)的大鼠骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗模型與對照組相比，胰島素作用后葡萄糖攝取率明顯降低，同時GLUT4的表達(dá)和轉(zhuǎn)位到細(xì)胞膜上的數(shù)量減少，A

4、kt表達(dá)減少，而PTEN和p-PTEN的表達(dá)以及細(xì)胞的凋亡率增加。BPV及二甲雙胍處理后與未處理的葡萄糖胺誘導(dǎo)的骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗模型相比，胰島素作用后葡萄糖攝取率均明顯增加，同時GLUT4的表達(dá)和轉(zhuǎn)位到細(xì)胞膜上的數(shù)量也都增加，Akt表達(dá)均增加，而PTEN和p-PTEN的表達(dá)和細(xì)胞凋亡率降低。此外，BPV及二甲雙胍處理后與對照組相比GLUT4的表達(dá)增加，p-PTEN表達(dá)降低。BPV組的Akt蛋白的表達(dá)增加，細(xì)胞凋亡率降低，但是二甲雙胍

5、組的Akt蛋白的表達(dá)減小，細(xì)胞凋亡率增加。而BPV及二甲雙胍處理后與對照組相比葡萄糖攝取率、GLUT4的轉(zhuǎn)位和PTEN表達(dá)無明顯改變。
　　 結(jié)論：
　　 葡萄糖胺可誘導(dǎo)大鼠骨骼肌細(xì)胞，建立胰島素抵抗模型。葡萄糖胺誘導(dǎo)的胰島素抵抗骨骼肌細(xì)胞GLUT4的表達(dá)、轉(zhuǎn)位障礙和細(xì)胞凋亡率增加可能與PTEN表達(dá)增加有關(guān)。BPV和二甲雙胍可改善葡萄糖胺誘導(dǎo)的胰島素抵抗骨骼肌細(xì)胞的葡萄糖攝取障礙、GLUT4的表達(dá)和轉(zhuǎn)位障礙以及細(xì)胞凋亡，