1、　　目的:觀察不同濃度葡萄糖和胰島素對HK-2細(xì)胞TGF-β1表達(dá)的影響及二者之間是否存在相互作用，以探討葡萄糖、胰島素經(jīng)TGF-β1途徑在糖尿病腎病(DN)腎間質(zhì)纖維化中的作用?！　》椒?所有實(shí)驗(yàn)均在體外培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞上進(jìn)行。根據(jù)所用培養(yǎng)液含葡萄糖、胰島素濃度的不同，實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞共分6組：A組(對照組)DMEM/F-12+5mmol/LD-葡萄糖+5uIU/mL胰島素；B組DMEM/F-12+5mmol/LD-葡萄糖+125uI

2、U/mL胰島素；C組DMEM/F-12+25mmol/LD-葡萄糖+125uIU/mL胰島素；D組DMEM/F-12+25mmol/LD-葡萄糖+1.25uIU/mL胰島素；E組DMEM/F-12+25mmol/LD-葡萄糖；F組DMEM/F-12+125uIU/mL胰島素，每種刺激條件設(shè)3個復(fù)孔，分別培養(yǎng)12h、24h、48h、72h，在各時間點(diǎn)收集培養(yǎng)液上清ELISA法測TGF-β1蛋白濃度，收集細(xì)胞計(jì)數(shù)后抽提總RNA，RT-PCR

3、同時擴(kuò)增TGF-β1和內(nèi)參照GAPDH目的片段，瓊脂糖凝膠電泳分離擴(kuò)增產(chǎn)物，凝膠成像系統(tǒng)上掃描分析，計(jì)算TGF-β1mRNA相對表達(dá)量。整個實(shí)驗(yàn)過程在合適的時間重復(fù)一次。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用t檢驗(yàn)和單因素方差分析，顯著性標(biāo)準(zhǔn)為P＜0.05。 結(jié)論:高濃度葡萄糖和胰島素均能上調(diào)HK-2細(xì)胞TGF-β1的表達(dá)，通過TGF-β1途徑參與腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生和發(fā)展過程，但二者是通過不同途徑發(fā)揮作用的，高濃度葡萄糖在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)TGF-β1mRN