1、核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum）是一種死體營養(yǎng)型植物病原真菌，在世界范圍內(nèi)引起多種植物病害，給作物造成了嚴(yán)重的產(chǎn)量損失并引起作物品質(zhì)下降。研究核盤菌的分子致病機制不僅可以為菌核病的防治提供潛在的藥物設(shè)計靶標(biāo)，并可為抗菌核病的作物分子育種提供參考依據(jù)。
　　Cerato-platanin(CP)蛋白是一類由真菌分泌的植物毒素蛋白，廣泛存在于絲狀真菌中。本研究從核盤菌中克隆和鑒定了一個編碼CP蛋白的基因Ss1

2、G_10096(Sclerotinia sclerotiorum Cerato-platanin protein1，Sscp1)。Sscp1基因全長969bp，只有一個外顯子，其中5'非翻譯區(qū)359bp，3'非翻譯區(qū)196bp，編碼區(qū)414bp。推定的SsCP1蛋白有137個氨基酸殘基，其中前18個氨基酸為信號肽序列，SsCP1蛋白的理論分子量12.1kDa，等電點(pI)4.61。SsCP1蛋白的疏水氨基酸殘基含量高達39％，親水平均

3、系數(shù)性(Grand Average of Hydropath，GRAVY)為0.029，表明SsCP1蛋白是一個可溶性蛋白。SsCP1蛋白與其他真菌的CPs十分保守，在其序列中含有3個保守的基序。
　　Sscp1基因在核盤菌侵染擬南芥葉片12h時上調(diào)表達12倍，在隨后的侵染過程中表達量一直處于較高水平，我們推測其參與了核盤菌的致病過程。Sscp1基因敲除突變體ΔSscp1及Sscp1互補菌株與野生型菌株相比，在菌絲生長、菌落形態(tài)、

4、菌核形成及產(chǎn)草酸能力等方面不存在顯著差異。ΔSscp1突變體在擬南芥和番茄葉片上的致病力顯著下降，互補轉(zhuǎn)化子致病力恢復(fù)正常，結(jié)果證實了Sscp1基因在核盤菌致病過程中發(fā)揮重要作用。
　　為了深入研究SsCP1參與核盤菌致病過程的分子機理，本研究構(gòu)建了一系列用于植物表達的標(biāo)簽蛋白載體、亞細胞定位載體以及基于TRV的病毒表達載體。利用TRV病毒表達載體在本氏煙中表達SsCP1，可引起寄主植物葉片產(chǎn)生壞死癥狀，并且表達含信號肽的全長蛋白

5、引起壞死的能力更強。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的浸花法轉(zhuǎn)化擬南芥生態(tài)型Col-0，獲得了表達Sscp1基因的35s:Sscp1轉(zhuǎn)基因植株，轉(zhuǎn)基因植株與Col-0在生長與發(fā)育方面不存在差異。35s:Sscp1轉(zhuǎn)基因植株內(nèi)源水楊酸含量升高，與水楊酸合成相關(guān)的異分支酸合成酶ICS1表達量上升;水楊酸信號途徑的標(biāo)記基因PR1、PR2和PR5等基因表達量顯著上調(diào);基礎(chǔ)抗性的核心基因BIK1和RBHOD表達量同樣上調(diào)。35s:Sscp1轉(zhuǎn)基因植株對核盤菌野生型

6、菌株的感病能力與Col-0相當(dāng)，但對ΔSscp1突變體顯得更為感病。同時，35s:Sscp1轉(zhuǎn)基因植株增強了對灰葡萄孢（Botrytis cinerea）、油菜黑斑病菌（Alternaria brassicicola）和高氏白粉病菌(Alternaria brassicicola)等死體營養(yǎng)型和活體營養(yǎng)型病原菌的抗性。通過免疫沉淀技術(shù)和蛋白質(zhì)LC-MS/MS技術(shù)，篩選獲得了與SsCP1蛋白互作的候選植物蛋白。通過酵母雙雜交、免疫共沉淀和

7、雙分子熒光互補等技術(shù)驗證了SsCP1與AtPR1互作;截短蛋白的互作試驗表明，位于SsCP1蛋白的motif1和motif2之間的序列是SsCP1蛋白與AtPR1蛋白互作的必須區(qū)域;亞細胞定位表明SsCP1蛋白與AtPR1蛋白共定位于植物細胞的質(zhì)外體空間。AtPR1基因過量表達的35S:PR1轉(zhuǎn)基因植株葉片抑制了核盤菌的擴展，說明AtPR1過表達提高了寄主植物的抗病性。
　　論文研究結(jié)果表明SsCP1蛋白與核盤菌致病力密切相關(guān)，S