洋蔥LFY同源基因的克隆與表達分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、洋蔥(Allium cepaL.)為百合科蔥屬二年生草本植物,有普通洋蔥、分蘗洋蔥和頂球洋蔥三個變種。洋蔥風(fēng)味獨特,且有降血壓、降血脂、抗動脈硬化和預(yù)防心肌梗塞的作用,現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)療和保健領(lǐng)域,市場前景廣闊。洋蔥為綠體春化型植物,如何調(diào)控其抽薹開花是長期困擾其生產(chǎn)和育種的問題。LFY基因是植物成花調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中各類基因的匯集點,不僅決定著花的形態(tài),而且影響著開花時間??寺FY基因,了解其表達特點,對以基因工程手段調(diào)控植物抽薹開

2、花具有重要的意義。
   本研究以普通洋蔥‘1007’品系為試材,采用RACE和同源基因克隆方法分離得到普通洋蔥LFY同源基因cDNA序列和基因組DNA序列,使用生物信息學(xué)軟件進行序列分析,采用實時熒光定量PCR技術(shù)對普通洋蔥LFY同源基因進行時空表達檢測;以分蘗洋蔥‘Z-010’品系為試材,采用同源基因克隆法分離得到分蘗洋蔥LFY同源基因cDNA序列,使用生物信息學(xué)軟件進行序列分析,采用半定量RT-PCR技術(shù)對分蘗洋蔥LFY同

3、源基因進行時空表達檢測。
   試驗結(jié)論歸納如下:
   (1)通過RACE方法克隆得到普通洋蔥LFY同源基因AcLFY,GenBank登錄號為JX275962。AcLFY基因全長1285 bp,5'非翻譯區(qū)長15 bp,3'非翻譯區(qū)長151 bp,ORF序列全長1119 bp,編碼372個氨基酸序列。AcLFY蛋白含有5'-N端脯氨酸富集區(qū)、亮氨酸拉鏈和酸性區(qū)等轉(zhuǎn)錄因子特有的結(jié)構(gòu)特征。
   (2)采用同源基因

4、克隆法得到AcLFY基因組序列,序列分析結(jié)果表明,AcLFY基因組序列長1263 bp,序列中包含2個內(nèi)含子,大小分別為63 bp和81 bp,Intron1位于基因組序列的第387~450個堿基之間,Intron2位于基因組序列的第960~1042個堿基之間。
   (3) qPCR檢測結(jié)果表明,AcLFY基因在洋蔥抽薹初期的花序分生組織中表達量達到最大,在花托、花柄以及成形和未成形的花器官中只有微量表達,開花期的葉片中也檢測

5、到AcLFY的大量表達,說明花器官完全形成后,AcLFY mRNA主要存在于葉片中。隨著花器官的發(fā)生至發(fā)育完成,葉片中AcLFY的表達呈增多的趨勢。
   (4)同源基因克隆法分離得到分蘗洋蔥LFY同源基因AcADLFY, GenBank登錄號為JX275963。AcADLFY基因cDNA序列全長1119 bp,編碼372個氨基酸序列,含有5'-N端脯氨酸富集區(qū)、酸性區(qū)和亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu),與普通洋蔥AcLFY基因結(jié)構(gòu)域極為相似,二

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