1、柑橘是我國的主栽果樹之一。以枳（Poncirus trifoliata（L．） Raf．）為遺傳資源培育抗性柑橘新種質(zhì)是柑橘育種的主要內(nèi)容之一。PPF—1是與開花、衰老及逆境有關(guān)的基因，本研究克隆了枳PPF—1同源基因PtPPF—1，并對其表達(dá)特性進(jìn)行了分析。主要結(jié)果如下： 根據(jù)豌豆PPF—1、擬南芥ALBINO3的cDNA全長序列比對結(jié)果設(shè)計引物，通過RT—PCR及3'—RACE擴(kuò)增得到了枳PPF—1同源基因的cDNA克隆片段

2、（命名PtPPF—1），該基因全長1493 bp，編碼一條長452個氨基酸殘基的多肽，理論分子量為125．1 kD，等電點為4．92。經(jīng)蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測發(fā)現(xiàn)其含有一個長為36個氨基酸殘基的葉綠體定位信號域和五個跨膜結(jié)構(gòu)域。氨基酸序列比對表明，PtPPF—1與豌豆PPF—1、擬南芥ALBINO3、水稻PPF—1相似性較高，與衣藻ALB3．2、性原細(xì)胞ALB3—1、綠領(lǐng)鞭藻類ALBINO3等同源蛋白相似性相對較低。 系統(tǒng)發(fā)育分析表明，P

3、tPPF—1與豌豆PPF—1親緣關(guān)系最近，其次為擬南芥ALBINO3和水稻PPF—1，四者同屬一小族，說明PPF—1基因在進(jìn)化過程中可能變異較小。 采用半定量RT—PCR對PtPPF—1的表達(dá)特性進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，PtPPF—1的表達(dá)量在枳葉片中最高，頂芽中次之，再次為莖，在根中沒有檢測到表達(dá)；而其紅橘（Citrus tangerine Hort．ex Tanaka）的PPF—1同源基因在頂芽、葉片和莖中的表達(dá)沒有差別。說明

4、PtPPF—1的表達(dá)不僅具有組織特異性，而且種屬間也存在差異。這可能與PtPPF—1基因含有葉綠體定位信號肽有關(guān)及枳抗性有關(guān)。 對不同植物生長調(diào)節(jié)劑處理枳葉中PtPPF—1表達(dá)情況進(jìn)行了分析，結(jié)果表明GA3、IAA、ABA促進(jìn)了PtPPF—1的表達(dá)，KT對PtPPF—1的表達(dá)有抑制作用。推測GA3、IAA、ABA信號通路可能與KT信號通路作用于PtPPF—1的表達(dá)存在不同的機(jī)制。PtPPF—1可能作為植物生長調(diào)節(jié)劑信號因子的一個

5、下游信號元件存在，參與信號傳導(dǎo)。 采用半定量RT—PCR對非生物脅迫（低溫、干旱、鹽）下枳的生理指標(biāo)及PtPPF—1的表達(dá)情況進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，這三種脅迫都能誘導(dǎo)PtPPF—1的表達(dá)。說明PtPPF—1基因能響應(yīng)這三種脅迫。SOD、POD活性在三種脅迫中均較高，CAT活性在三種脅迫中處于低水平；脯氨酸含量在三種脅迫中均表現(xiàn)為持續(xù)上升。三種脅迫中尤其是低溫脅迫SOD、POD活性及脯氨酸含量的變化趨勢與PtPPF—1的表達(dá)有很大