1、分類號：密級：$661單位代碼：學(xué)號：100862008320外源基因在轉(zhuǎn)基因蘋果中的穩(wěn)定性及遺傳表現(xiàn)研究StabilityandGeneticExpressionofExogenousgeneinTransgenicApple學(xué)位申請人：指導(dǎo)老師：學(xué)科專業(yè)：學(xué)位類別：授予單位：答辯日期：常騰飛師校欣教授果樹學(xué)農(nóng)學(xué)碩士河北農(nóng)業(yè)大學(xué)二。一二年五月三十一日摘要lIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIiY2143676外源基因轉(zhuǎn)入植物基因組

2、后，能否在受體植物中穩(wěn)定表達(dá)和遺傳是轉(zhuǎn)基因植物能否商品化的首要條件，這就需要不斷觀察和檢測轉(zhuǎn)基因植株及后代的遺傳表現(xiàn)。本試驗選用繼代保存12年的轉(zhuǎn)C矽”基因節(jié)果組培苗和定植46年的田問轉(zhuǎn)基因植株，研究外源基因在受體植株中是否穩(wěn)定存在；調(diào)查了轉(zhuǎn)基因植株的花粉和果實特性；對轉(zhuǎn)基因植株雜交F代果實進(jìn)行種胚培養(yǎng)，研究了外源基因在轉(zhuǎn)基因蘋果雜種后代的遺傳分離規(guī)律。主要研究結(jié)果如下：1對繼代培養(yǎng)保存12年的嘎拉、王林、喬納金、富士品種59個株系轉(zhuǎn)o

3、H基因蘋果組培苗分別進(jìn)行卡那霉素篩選和PCR檢測，結(jié)果表明：59個株系均可擴增出。玎特異基因片斷；除王林2個轉(zhuǎn)化株系部分單株組培苗在50m∥LVTJIj霉素篩選時出現(xiàn)白化，表現(xiàn)卡那霉素敏感外，其余轉(zhuǎn)基因株系組培苗均表現(xiàn)出卡那霉素抗性，說明外源npt∥和。刀基因可以在長期保存的繼代組培苗中穩(wěn)定存在。2對定植4～6年的田間轉(zhuǎn)化植株的葉片、根系、花粉、果實進(jìn)行外源基因PCR檢測，結(jié)果表明：嘎拉、王林和富士品種所測轉(zhuǎn)化株系葉片和根系中、嘎拉品種

4、花粉與果實中C勿口基因均穩(wěn)定存在；而嘎拉品種極少部分株系的根系、花粉和果實中未檢測到C≯T／基因，說明Cp口基因可以在生殖器官穩(wěn)定存在，并具有遺傳給后代的能力。3外源基因?qū)牒髮D(zhuǎn)基因植株的花粉數(shù)量及活力均有影響，不同轉(zhuǎn)基因嘎拉株系每枚花藥的平均花粉量、花粉離體萌發(fā)率及花粉活力區(qū)別很大，且有顯著低于非轉(zhuǎn)基因?qū)φ盏内厔荨?以轉(zhuǎn)基因嘎拉蘋果與未轉(zhuǎn)化富士蘋果進(jìn)行雜交，采收果實種子進(jìn)行種胚培養(yǎng)，確定了適宜蘋果種胚離體培養(yǎng)條件為：種子在8℃左右低

5、溫下休眠4周，經(jīng)25。C左右催芽處理，發(fā)芽后的種子用01％升汞溶液消毒8—10min，接種于培養(yǎng)基上獲得雜交株系。5對轉(zhuǎn)基因蘋果與非轉(zhuǎn)基因蘋果分別做父、母本得到的雜交后代進(jìn)行卡那霉素篩選和PCR檢測，卡那霉素抗性植株與卡那霉素敏感植株在Fl代植株中表現(xiàn)為1：1分離，證實nptI／標(biāo)記基因為一顯性雜合基因，可通過有性繁殖在轉(zhuǎn)基因后代植株中穩(wěn)定遺傳；雜交后代PCR檢測表明卡那霉素抗性苗含有的npt口和Cp口基因緊密連鎖，在轉(zhuǎn)基因植株雜交后代