1、動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)主要應(yīng)用于動(dòng)物品種改良、生產(chǎn)珍貴蛋白、建立疾病模型、基因治療和器官移植等方面。近十年來，轉(zhuǎn)基因技術(shù)與體細(xì)胞核移植技術(shù)的結(jié)合使轉(zhuǎn)基因的生產(chǎn)有了突飛猛進(jìn)的發(fā)展。目前人們已獲得小鼠、大鼠、豬、牛和羊等多種轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物，本實(shí)驗(yàn)室也于2006年獲得了我國(guó)首例綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬。但是，成功獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物并不是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究的最終目的，如何利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)為人類的需求服務(wù)才是科研人員始終要面對(duì)的課題。在畜牧生產(chǎn)領(lǐng)域，通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)

2、培育家畜新品種是轉(zhuǎn)基因技術(shù)應(yīng)用的重要體現(xiàn)，在我國(guó)這方面已經(jīng)引起了廣泛關(guān)注。但迄今為止，外源基因在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中無法穩(wěn)定的遺傳和表達(dá)仍然是轉(zhuǎn)基因遺傳育種產(chǎn)業(yè)化亟待解決的問題。據(jù)此，本研究以綠色熒光蛋白基因豬及其后代為研究對(duì)象，以GFP外源基因?yàn)檠芯磕繕?biāo)，通過對(duì)外源基因整合位點(diǎn)、拷貝數(shù)以及啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化和組蛋白H3、H4及特定賴氨酸位點(diǎn)乙?；揎椀臋z測(cè)，闡明表觀遺傳修飾、位置效應(yīng)和遺傳對(duì)外源基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。
　　 主要研究結(jié)

3、果如下：
　　 1.0.25uM組蛋白去乙?；敢种苿㏕SA處理24h和0.5uM DNA甲基化酶抑制5-AZA-dC處理48h對(duì)豬胎兒成纖維細(xì)胞的活率沒有明顯影響；
　　 2.TSA和5-AZA-dC處理轉(zhuǎn)基因豬成纖維細(xì)胞可以通過阻止外源基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化和組蛋白去乙?；岣咄庠椿虮磉_(dá)水平和陽性細(xì)胞率，并且每10天采用TSA和5-AZA-dC聯(lián)合處理轉(zhuǎn)基因豬成纖維細(xì)胞能使外源基因在至少在60天內(nèi)維持高水平的表達(dá)

4、；
　　 3.在轉(zhuǎn)基因豬不同組織之間，外源基因的表達(dá)水平存在顯著差異（P<0.05），并且除了卵巢外，在不同轉(zhuǎn)基因豬同種組織之間外源基因的表達(dá)水平也存在顯著差異（P<0.001）；
　　 4.外源基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化、組蛋白H3和H3K9及H4乙酰化修飾在相同轉(zhuǎn)基因豬不同組織之間和不同轉(zhuǎn)基因豬同種組織之間都存在顯著差異（P<0.001）；
　　 5.TSA和5-AZA-dC聯(lián)合處理后，外源基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲

5、基化和組蛋白乙?；揎椩诓煌D(zhuǎn)基因豬成纖維細(xì)胞系間不存在顯著差異（P>0.05），但外源基因表達(dá)水平之間的差異仍然顯著（P<0.001）；
　　 6.外源基因表達(dá)在轉(zhuǎn)基因豬成纖維細(xì)胞體外擴(kuò)增和轉(zhuǎn)基因豬生長(zhǎng)發(fā)育以及繁殖傳代過程中都顯著下降（P<0.001）；
　　 7.外源基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化修飾在轉(zhuǎn)基因豬成纖維細(xì)胞體外擴(kuò)增和轉(zhuǎn)基因豬生長(zhǎng)發(fā)育以及繁殖傳代過程中逐漸上升；
　　 8.外源基因拷貝在轉(zhuǎn)基因豬成纖維細(xì)