1、背景：神經(jīng)保護治療是急性腦缺血等神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究熱點之一。中藥治療是國內(nèi)急性腦缺血常用治療手段,具有巨大潛力。近年來,多項臨床研究及腦缺血動物模型體內(nèi)實驗表明,丹紅注射液對急性腦缺血治療有效。體外實驗主要集中在丹紅注射液對血管內(nèi)皮細胞的作用方面,尚少見丹紅注射液對于體外培養(yǎng)神經(jīng)元模擬缺血損傷后是否具有神經(jīng)保護作用的報道。由N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受體介導的損傷途徑是興奮性氨基酸神經(jīng)毒

2、性作用的主要通路之一,可導致細胞凋亡。
　　 目的：以NMDA誘導體外培養(yǎng)胎鼠皮層神經(jīng)元的興奮性毒性損傷,研究丹紅注射液對于神經(jīng)元NMDA損傷后是否具有保護作用。為進一步的研究包括分析該藥有效成分并闡明其具體的保護機制等打下基礎(chǔ)。
　　 方法：采用孕17-18天的KM孕小鼠,以神經(jīng)元完全培養(yǎng)液進行胎鼠原代皮層神經(jīng)元培養(yǎng)。通過神經(jīng)元微管相關(guān)蛋白(Microtubule-associated protein-2,MAP-2)

3、染色進行神經(jīng)元鑒定。神經(jīng)元培養(yǎng)至10d時,隨機分為3組,分別加入濃度為50umol/1、150umol/1及300umol/1的NMDA,根據(jù)噻唑蘭(methyl-thiazole-tetrazolium,MTT)法細胞生存率檢測及乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase,LDH)釋放率測定結(jié)果,選取3組中神經(jīng)元損傷最明顯的一組,以該組NMDA濃度建立NMDA損傷模型。將培養(yǎng)的神經(jīng)元隨機分為3組:正常對照組、NMDA損傷組、

4、丹紅給藥組。正常對照組按原神經(jīng)元培養(yǎng)條件繼續(xù)培養(yǎng)。NMDA損傷組按上述方法建立NMDA損傷模型。丹紅給藥組分別在加入NMDA后即刻給予0.005μl/ml及0.01μl/ml的丹紅注射液治療。以MTT法檢測細胞生存率,LDH釋放率測定細胞損傷,通過Hoechst及TUNEL染色檢測細胞凋亡情況。
　　 結(jié)果：NMDA損傷后神經(jīng)元腫脹、軸突斷裂。隨著NMDA濃度的增高,細胞生存率依次下降,LDH釋放率依次增加,以NMDA 300u