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![桑白皮抗MRSA活性成分研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/11/9/b32f31cf-ab94-4374-a222-015b686e3977/b32f31cf-ab94-4374-a222-015b686e39771.gif)
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文檔簡介
1、目的:
1.篩選??粕僦参锷0灼?Morus albaL.)的抗臨床耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)等病原菌的有效部位,明確活性單體成分的化學結(jié)構(gòu)。
2.測定桑白皮中活性單體化合物對MRSA等病原菌的抗菌活性強度,在此基礎上進一步探討其作用方式,測定活性單體化合物與常用抗菌素聯(lián)合抗MRSA作用的方式。
2、3.研究部分活性單體化合物對人肝細胞株HL-7702和肺癌細胞株A549的細胞毒性。
方法:
1.以生物活性導向分離(bioactivity-guided fractionation)的方法,即結(jié)合細菌藥物敏感性試驗,采用溶劑萃取、柱色譜分離和測定抑菌圈等方法,篩選桑白皮中具有抗MRSA活性的部位并跟蹤篩選活性部位的色譜分段產(chǎn)物,對高活性的色譜片段進一步分離純化得到活性單體化合物,結(jié)合現(xiàn)代波譜分析技術和理化方
3、法鑒定其結(jié)構(gòu)。
2.對分離得到的活性單體化合物進行系統(tǒng)的抗MRSA等病原菌活性的研究;采用微量稀釋法測定其直接作用的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)。根掘測定結(jié)果,采用紙片擴散法(Disk diffusion method)篩選與單體化合物有聯(lián)合抗菌作用的抗菌劑,進一步采用微量棋盤稀釋法(Checkboard microdilution method)和時間-殺菌曲線法(Time-killing curve)
4、評價化合物與所篩選出的抗菌劑的聯(lián)合作用方式。
3.采用MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium]法,通過測定吸光度(OD)值來評價化合物對人肝細胞株HL-7702和肺癌細胞株A549的細胞毒性活性。
結(jié)果:
1.從桑白皮提取物的乙酸乙酯活性部位中分離得到
5、11個活性單體化合物,經(jīng)理化性質(zhì)及波譜數(shù)據(jù)鑒定其化學結(jié)構(gòu)為:Cyclocommunol(化合物1)、Multicaulisin(化合物2)、SanggenonG(化合物3)、Moursinol(化合物4)、Morusin(化合物5)、AlbanolA(MulberrofuranG)(化合物6)、β-谷甾醇(化合物7)、MoracinM(化合物8)、AlbaninG(KuwanonH)(化合物9)、(E)-oxyresveraterol(
6、化合物10)、KuwanonE(化合物11)。
2.微量稀釋法結(jié)果顯示,化合物1、2、3、9、11對MRSA作用最強,其MIC范圍為2~16μg/mL,MBC范圍為8~128μg/mL;化合物5、6、8、10對MRSA作用次之,其MIC范圍為8~128μg/mL,MBC范圍為32~256μg/mL;化合物4、7的抗MRSA活性最弱,其MIC值均≥512μg/mL,MBC值大于1024μg/mL。
3.受試單體
7、化合物與臨床常用抗菌劑聯(lián)合作用方式考察的結(jié)果顯示:(1)紙片擴散法篩選出來的抗菌劑主要為氨基糖苷類、喹諾酮類及糖肽類。(2)微量稀釋棋盤法實驗結(jié)果顯示:化合物1與慶大霉素、阿米卡星、左氧氟沙星、萬古霉素等聯(lián)合用藥的FICI在0.375~1.062之間,多數(shù)表現(xiàn)為相加或無關作用;化合物2與慶大霉素、阿米卡星及依替米星聯(lián)合抗MRSA的FICI范圍為0.25~1,表現(xiàn)為協(xié)同或相加作用;化合物3與阿米卡星、依替米星聯(lián)合作用的FICI范圍為0.3
8、75~0.75,表現(xiàn)為協(xié)同或相加作用;化合物4與阿米卡星、鏈霉素、環(huán)丙沙星、萬古霉素及替考拉寧聯(lián)合的FICI范圍為0.094~0.75,表現(xiàn)為協(xié)同、相加作用;化合物5與阿米卡星、依替米星聯(lián)合作用FICI范圍為0.188~1,表現(xiàn)為協(xié)同或相加作用;化合物8與慶大霉素、依替米星聯(lián)合應用FICI范圍為0.25~0.75,表現(xiàn)為協(xié)同或相加作用;化合物9與阿米卡星、左氧氟沙星聯(lián)合作用FICI范圍為0.188~1.5,表現(xiàn)為協(xié)同、相加或無關作用;化
9、合物11與依替米星、阿米卡星聯(lián)合作用FICI范圍為0.259~1,表現(xiàn)為協(xié)同或相加作用。(3)時間殺菌曲線法實驗結(jié)果顯示:化合物1、2、5與抗菌素在24h時單用與聯(lián)用相比,其log10CFU/mL降低值均在0~1之間,表現(xiàn)為無關作用;化合物3與阿米卡星聯(lián)合時其log10CFU/mL降低值大于2,表現(xiàn)為協(xié)同作用,與依替米星聯(lián)合時△log10CFU/mL在1~2之間,表現(xiàn)為相加作用;化合物4、8與抗菌素聯(lián)用的△log10CFU/mL在0~2
10、之間,表現(xiàn)為相加或無關作用;化合物9與阿米卡星及左氧氟沙星聯(lián)合的△log10CFU/mL均大于2,表現(xiàn)為協(xié)同作用。
4.桑白皮單體化合物1~4的細胞毒性實驗結(jié)果:化合物2和3對A549以及HL-7702的IC50值范圍在3~4.4μg/mL之間;化合物1和4對A549以及HL-7702的IC50值范圍在27.4~260μg/mL之間。
結(jié)論:
通過對桑白皮提取物體外抗MRSA活性的追蹤篩選,從其
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