1、目的:1.提取，分離藤黃科金絲桃屬植物地耳草(Hypericum japonicum ThunbMurray)的有效成分。2.探討單體化合物對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的抗菌活性，以及活性單體與臨床常用的抗生素聯合用藥后抗MRSA的作用效果。
　　方法:1.結合細菌藥物敏感性試驗與柱層析分離方法，對地耳草乙酸乙酯部位的分段產物進行生物活性跟蹤篩選，對具有活性的片段進一步分離純化得到單體化合物，結合現代波譜分析技術和理化方

2、法鑒定其結構;2.對成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院收集的45株MRSA，采用藥敏紙片測定對16種抗菌藥物的耐藥性;應用多重PCR對MRSA進行SCCmec基因分型。3.對分離得到的6個單體化合物，采用肉湯二倍稀釋法測定其最低抑菌濃度(MIC）和最低殺菌濃度(MBC)進行了抗MRSA活性研究。根據測試結果，進一步采用微量棋盤稀釋法分別測定3個活性單體與臨床常用抗生素（氨芐西林，頭孢他啶，左氧氟沙星，阿奇霉素）聯合用藥對SCCmecⅢ型MRSA的抑菌效

3、果，以部分抑菌濃度指數(FICI)來評價其聯合用藥效果;進一步繪制時間殺菌曲線驗證受試藥物與臨床常用抗生素的協同作用。另外，采用紙片法考察二氫槲皮素及糖苷類化合物與喹諾酮類抗生素的協同作用。
　　結果:1.從該植物中跟蹤篩選分離得到了6個單體化合物:(1)異巴西紅厚殼素，(2)2，6-二羥基-3，5-二甲基-1-異丁酰苯-4-O-葡萄糖苷，(3)二氫槲皮素-7-O-鼠李糖昔、(4)二氫山奈酚-3-O-鼠李糖苷，(5)鄰苯二甲酸二丁

4、酯，(6)槲皮苷。2.常用抗生素的敏感性結果顯示，對氨芐西林、青霉素、苯唑西林、頭孢西丁均100％耐藥，對萬古霉素、利萘唑胺敏感，對其他抗生素均存在一定的耐藥;本醫(yī)院MRSA以SCCmecⅢ型為主，占75.6％(34/45)，SCCmecⅠ型為4.4％(2/45)，SCCmecⅡ型為17.8％(8/45)，SCCmecⅣ型為2.2％(1/45)。3.化合物1、3和4對臨床來源的MRSA均表現出較好的抗菌活性，MIC50分別為8μg/mL

5、、32μg/mL、64μg/mL; MIC90分別為16μg/mL、64μg/mL、128μg/mL?；衔?、5和6的MIC大于1mg。針對SCCmecⅢ型，化合物1、3、4與氨芐西林聯合為協同(FICI≤0.5)或相加(0.5＜FICI≤1.0)作用，與頭孢他啶和左氧氟沙星聯合為協同作用(FICI≤0.5)，與阿奇霉素聯合為無關作用(1.0＜FICI≤2.0)。隨機抽取的1株MRSA4的時間-殺菌曲線顯示，合用時log10CFU/m

6、L比化合物或抗生素單用時明顯下降。聯合用藥結果顯示二氫槲皮素及糖苷類化合物分別與3個喹諾酮類抗生素合用FICI≤0.5，log10CFU/mL比化合物或抗生素單用時明顯下降，抑菌圈比化合物或抗生素單用時明顯增大。
　　結論:地耳草中分離得到的化合物1、3和4，不僅有較好的抗MRSA活性，而且與氨芐西林、頭孢他啶、左氧氟沙星聯合用藥有相加或協同作用，可以增強或逆轉三個抗生素的抗SCCmecⅢ型MRSA的活性;二氫槲皮素及糖苷類化合物