1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文RKCα和PKCδ在不同發(fā)育階段小鼠睪丸中的差異性表達姓名：馮晨申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：于秉治2000.4.1實驗材料與方法本實驗運用免疫組化、Western印跡雜交及RT一PCR等方法檢測了出生后1周齡、2周齡、3周齡、5周齡、8周齡、12周齡雄性昆明系小白鼠皋丸組織中PKCa和PKC8的表達。1.Western印跡雜交:用PKC一a和PKC一8特異性抗體檢測各周齡小鼠辜丸組織蛋白

2、提取液中PKC一。和PKC一8蛋白表達數(shù)量。2.免疫組織化學檢測:各周齡小鼠翠丸組織常規(guī)固定，石蠟包埋，切片，用兔抗鼠PKC一a和PKC一8的特異性抗體和過氧化氫酶標記的鏈酶卵白素(SP)染色試劑盒檢測PKC一a和PKC一8的蛋白表達陽性細胞。3.RT一PCR半定量測定:用TRIzol總RNA提取試劑提取皋丸組織總RNA，反轉錄合成，DNA第一鏈，分別擴增PKC一aPKC一8的PCR產物，檢測兩者mRNA相對含量。4.統(tǒng)計分析:運用單因

3、素方差分析判斷是否各組總體均數(shù)全部相等各組均數(shù)間兩兩比較運用LSD方法。實驗結果1.Western印跡雜交結果:各周齡樣品均可見PKC一a的表達，且掃描灰度值基本一致生后1周齡2周齡拿丸樣品中PKC一8蛋白幾乎無表達，第三周開始出現(xiàn)微弱表達，以后隨周齡增加掃描灰度值逐漸增加。2.免疫組化結果:各周齡小鼠的皋丸中均可見到PKC一a的表達且分布廣泛，各組間無差異(P0.05)生后兩周小鼠辜丸中無PKC一S的表達，第三周開始在管腔側出現(xiàn)少量陽