1、目的： 探討神經(jīng)源性分化因子(Netlrogenic Differentiation，NeuroD)在大鼠神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中，表達(dá)量及部位的變化情況，進(jìn)而研究其對神經(jīng)分化的影響。 方法： 利用神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)志分子NSE和星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記分子GFAP，對發(fā)育不同時期的大鼠腦組織進(jìn)行NeuroD與NSE、GFAP的共標(biāo)記免疫熒光染色，激光共聚焦顯微鏡檢測蛋白在鼠腦中的分布情況；利用蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Brot

2、)對NeuroD蛋白在各腦組分和不同發(fā)育階段的表達(dá)進(jìn)行半定量分析，利用RT-PCR方法檢測NetJroD mRNA在大鼠腦不同發(fā)育時段的表達(dá)變化，進(jìn)而確定NelaroD在鼠腦發(fā)育過程中表達(dá)的時空特異性。 結(jié)果： 免疫熒光染色結(jié)果顯示：NeuroD蛋白(綠)分布區(qū)域與神經(jīng)元(NSE)(紅)相重合，與星形膠質(zhì)細(xì)胞(GFAP)(紅)部分相符。NetJroD主要分布于大腦皮質(zhì)，其次在小腦也有部分表達(dá)，在間腦內(nèi)，NeuroD在側(cè)腦

3、室附近見有多量表達(dá)。蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果顯示，NeuroD在腦組織各組分中均有表達(dá)，其中以大腦皮質(zhì)表達(dá)最為豐富，其次為間腦和小腦。NeuroD蛋白在大鼠腦發(fā)育的不同時期都有表達(dá)，從神經(jīng)管發(fā)生的E9.5天到腦形態(tài)初步建立的E12.5天，NeuroD的表達(dá)呈現(xiàn)明顯升高，E12.5天達(dá)到最高峰，在胚胎發(fā)育的晚期，腦組織形態(tài)得到進(jìn)一步的完善，在E21.5天腦組織各部分進(jìn)一步成熟，此時NeuroD達(dá)到第二次高峰，而出生后NeuroD表達(dá)無明顯的差異

4、。NettroD mRNA在E7.5天時即開始有表達(dá)，目的基因和β-actin在E10.5天至E12.5天之間先后達(dá)到高峰，出生前(E21.5天)形成第二次表達(dá)高峰，RT-PCR結(jié)果與Western-blotting結(jié)果基本一致。 結(jié)論： 在不同發(fā)育時期的大鼠腦組織中，NeuroD的表達(dá)在時間和空間上呈現(xiàn)出明顯的差異性：在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育早、中期，即從E9.5天神經(jīng)管閉合至E12.5天形成前腦、中腦和后腦的發(fā)育原基，和胚胎發(fā)