1、從最新的流行病學調查來看，乳腺癌的發(fā)病率依舊呈逐年上升趨勢。隨著我國經濟的不斷發(fā)展，飲食結構也開始偏向西方發(fā)達國家，我國女性雌激素水平的上升，經期提前和延長都使得我國女性乳腺癌及婦科腫瘤發(fā)病率年年攀升。越來越多的年輕女性被診斷出乳腺癌。有國外資料顯示，近三年我國女性的乳腺癌發(fā)病率的中位數比歐美發(fā)達國家早了十年。我國女性乳腺癌的發(fā)病率已經躍居惡性腫瘤第一位。
　　隨著現代診療技術的不斷提高，乳腺癌的早期診斷越為精確，運用不同的治療手

2、法如:放療、化療、手術、內分泌及分子靶向治療使得乳腺癌的總生存率有了顯著的改善。雖然總的生存率得到了改善，但是會有30％-40％的患者出現復發(fā)和轉移。目前乳腺癌的治療手段仍是以手術為主的綜合治療，但是僅憑手術無法改善遠期生存率。放化療是治療乳腺癌重要的輔助手段，患者通過放化療可以取得一個較為理想的遠期生存率，但是放化療之后的副作用往往是患者所不能接受的，許多患者因放化療的毒副反應而被迫停止治療而造成乳腺癌的二次復發(fā)，長期的放化療也會增加

3、乳腺癌細胞的抵抗作用。因此我們便希望尋找更有效的輔助治療方法來改善乳腺癌的遠期生存率，同時該輔助療法降低化療對乳腺癌患者產生的毒副作用。維生素C(VitC)是臨床上常用的一種輔助藥物，但是在化療時使用的劑量一般都比較小，根據國外一些文獻報道大劑量的靜脈注射（10g/日）對于腫瘤治療是有效的。紫杉醇(PTX)是臨床上乳腺癌的常用化療藥之一，是從紅豆杉的樹皮中提取的抗癌有效成分。使用PTX化療會產生常見的化療毒副反應，如:惡心，嘔吐，脫發(fā)，

4、頭暈，頭痛等。這也是化療患者難以堅持的主要原因。尋找一種既可以提高化療療效又可以降低化療毒副反應的方法就顯得迫在眉睫。
　　目的:
　　本研究以乳腺癌細胞MCF-7為研究對象，探討VitC聯合PTX在體外對乳腺癌細胞凋亡相關因子的影響，為以后乳腺癌的臨床治療提供新的方法和思路。
　　方法:
　　1.研究材料
　　乳腺癌MCF-7細胞，VitC注射液，PTX
　　2.研究方法
　　第一部分:體外培

5、養(yǎng)乳腺癌MCF-7細胞，使用MTS法分別檢測VitC、PTX、VitC聯合PTX對MCF-7的增殖抑制率，并計算出IC50值（抑制一半細胞增殖的藥物濃度）。計算腫瘤細胞的增殖抑制率，使用金氏修正公式來計算兩種藥物之間是否為協同關系。
　　第二部分:取對數生長期的MCF-7細胞，細胞計數后，鋪板，每孔約1×105cells。靜置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中24小時待同步細胞周期。根據AnnexinⅤ-FITC Apoptosis D

6、etection Kit產品試劑盒使用說明書依次加入試劑，最后使用流式細胞儀檢測，實驗重復3次。
　　第三部:Western Blotting（免疫印跡法）檢測增殖和凋亡相關蛋白，培養(yǎng)MCF-7細胞系待同步細胞周期后，根據實驗設計加入不同藥物，分別是VitC單藥、PTX單藥、PTX0.625mmol/L分別加VitC高中低三組，每組設3個復孔。按試劑盒說明提取總蛋白，檢測Caspase-3和Bcl-2的表達，以β-actin為內參

7、。使用Image J軟件分析蛋白條帶灰度值，實驗重復3次。
　　結果:
　　第一部分:VitC、PTX、VitC聯合PTX對體外培養(yǎng)的乳腺癌MCF-7細胞具有不同程度的抑制作用，從實驗結果來看，呈濃度相關性。低劑量的VitC單藥(＜1.25mmol/L)對乳腺癌MCF-7細胞幾乎沒有影響。大劑量的VitC單藥（＞1.25mmol/L）對MCF-7細胞的增值抑制率呈濃度相關。PTX單藥對MCF-7的增殖呈藥物濃度依賴性。1mm

8、ol/LVitC分別于0.00475μmol/L、0.00237μmol/L、0.00118μmol/L的PTX聯合用藥增殖抑制率分別為82％、67％、50％。
　　第二部分:正常對數期的乳腺癌MCF-7細胞與上皮細胞一樣，顯微鏡下呈上皮樣生長，細胞多形性，輪廓清晰，死亡和凋亡細胞數量都較少。經VitC單藥不同濃度、PTX單藥、VitC不同濃度聯合PTX固定濃度作用后，使用流式細胞儀檢測每組凋亡率，多組間使用單因素方差分析（one

9、-way ANOVA），組間兩兩比較使用SNK-q檢驗，VitC0.5mmol/L組與對照組相比較，凋亡率無明顯差別，差異無統計學意義(P＞0.05)。PTX組和VitC聯合PTX組與對照組相比較，凋亡率有明顯差別，差異有統計學意義(P＜0.05)。VitC聯合PTX組與PTX組相比較，凋亡率有明顯差別，差異有統計學意義(P＜0.05)。
　　第三部分:檢測Caspase-3和Bcl-2的表達。乳腺癌MCF-7細胞經PTX單藥及與

10、不同濃度的VitC聯合作用，隨著VitC濃度的增加凋亡抑制蛋白Bcl—2的表達逐漸降低，凋亡促進蛋白Caspase-3的表達逐漸升高。PTX單藥、PTX組+VitC0.5mmol/L組、PTX組+VitC1mmol/L組、PTX組+VitC2mmol/L組與空白對照組比較蛋白相對表達量差異有統計學意義(P＜0.05)。
　　結論:
　　1.VitC單藥、PTX單藥和VitC聯合PTX均可以對MCF-7增殖產生濃度抑制作用，而