小蔥酸性磷酸酶的分離純化及性質(zhì)和功能基團研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、酸性磷酸酶(Acidphospoatase,簡稱ACP,E.C.3.1.3.2),是一種在酸性條件下催化磷酸單酯水解釋放出無機磷的巰基酶。在植物中,酸性磷酸酶直接參與磷的代謝轉(zhuǎn)運過程,對植物形成良好根態(tài)結(jié)構(gòu),適應(yīng)低磷脅迫具有重要作用。臨床上將血清中ACP水平變化作為診斷前列腺癌、子宮頸癌、胃癌、脊髓損傷等疾病的重要指標。在環(huán)境污染監(jiān)測中,以ACP水平變化來作為指標。因此近年來酸性磷酸酶引起國內(nèi)外學者的廣泛重視。到目前為止,已有多種來源的

2、酸性磷酸酶得到了詳細研究,但未見小蔥酸性磷酸酶的研究報道。因此,本文以廉價、來源廣泛的小蔥為實驗材料,對酸性磷酸酶進行了分離純化以及部分酶學性質(zhì)研究,旨在為酸性磷酸酶的深入應(yīng)用研究提供了更多的數(shù)據(jù)支持。其結(jié)果如下:
   1.小蔥酸性磷酸酶的分離純化
   新鮮小蔥通過去根,勻漿、硫酸銨沉淀、CM-Sepharose離子交換層析以及Superdex-200凝膠過濾層析等方法,獲得了電泳純的小蔥酸性磷酸酶。其回收率為8.0

3、%,純化倍數(shù)為234.1倍,酶比活力為527.4U/mg。
   2.小蔥酸性磷酸酶的性質(zhì)研究
   小蔥酸性磷酸酶的全酶亞基相對分子質(zhì)量和相對分子質(zhì)量分別為59.6kD和57.8kD,推測該酶可能由單亞基組成。它的最適反應(yīng)溫度為50℃,最適pH值為5.4。該酶的穩(wěn)定性不是太好,其對對硝基苯磷酸二鈉的表觀Km值為3.63mmol/L。
   3.有機溶劑、化學試劑及金屬離子對小蔥酸性磷酸酶的影響
   甲

4、醇、乙醇、異丙醇等對該酶有較強的抑制作用,10%的甘油對其具有激活作用,抗壞血酸,過氧化氫對其具有抑制作用,抗壞血酸的抑制作用比較大,而EDTA和尿素對該酶則表現(xiàn)出一定的激活作用。Ca2+、Ag+、Zn2+、Cu2+、Co2+、Pb2+對小蔥酸性磷酸酶的抑制作用比較強,Cu2+對其影響最大,最終都使酶幾乎完全失活,而K+、Mg2+對酸性磷酸酶的抑制作用不是很明顯,Mn2+低濃度對酶的抑制作用比較大,高濃度對其抑制作用減少。
  

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