1、酪氨酸酶（簡稱TYR）是一種多酚氧化酶，有時也稱酚氧化酶，屬于結(jié)構(gòu)復(fù)雜的多亞基的含銅氧化還原酶，廣泛存在于微生物、動植物及人體內(nèi)。兼有加氧酶和氧化酶的雙重功能，能將單酚加氧成二酚，又可以將二酚等多元酚氧化成醌。不僅是生物體合成黑色素等產(chǎn)生色斑的關(guān)鍵酶，并且參與多酚類物質(zhì)的形成。植物中的酪氨酸酶主要與酚類代謝、植物抗病有關(guān)。它可以誘導(dǎo)植物抗?fàn)I養(yǎng)防御反應(yīng)，降低對食草動物的營養(yǎng)作用，而且對細(xì)菌有抑制作用，防止細(xì)菌擴散。目前，酪氨酸酶被廣泛地應(yīng)

2、用于醫(yī)藥、環(huán)境、食品、精細(xì)化工等領(lǐng)域，如在食品和水果工業(yè)中，一方面由于酪氨酸酶氧化酚類物質(zhì)生成黑色素，降低了其營養(yǎng)價值和風(fēng)味，因此抑制酪氨酸酶具有重要的意義。另一方面為了增加色調(diào)，有意加入酪氨酸酶，如在紅茶的制作、葡萄干、棗的曬制、啤酒生產(chǎn)等，為了增加酒的色澤，常需加入適量的酪氨酸酶。因此獲得來源廣泛成本低廉的酪氨酸酶并對其部分性質(zhì)進(jìn)行研究具有重要的理論和經(jīng)濟(jì)意義。
　　蕹菜，又稱空心菜，為旋花科甘薯屬一年生或多年生草本蔬菜，具有

3、產(chǎn)量高，抗性強，病蟲害少等優(yōu)點，是堵缺補淡的首選蔬菜。本文從蕹菜葉中分離純化了TYR，并對其部分性質(zhì)進(jìn)行了研究，不僅可以為尋求蕹菜酪氨酸酶的抑制劑提供參考，還可以提供一種廉價易得的酪氨酸酶來源，從而提高其經(jīng)濟(jì)價值。研究結(jié)果如下:
　　1.蕹菜葉酪氨酸酶的分離純化
　　新鮮蕹菜葉蕹菜葉經(jīng)勻漿、緩沖液提取、硫酸銨分級沉淀、DEAE-Sepharose離子交換層析、Superdex-200凝膠過濾層析，獲得電泳純的酪氨酸酶。該酶比

4、活力達(dá)到114.53U/mg，酶活回收率為11.33％，純化倍數(shù)為99.59。
　　2.蕹菜葉酪氨酸酶的部分酶學(xué)性質(zhì)研究
　　結(jié)果表明，蕹菜葉酪氨酸酶的全分子質(zhì)量為77.60kD，亞基分子質(zhì)量為38.70kD，推測該酶是由二個相同亞基構(gòu)成;最適溫度為45℃，最適pH值為7.5，該酶在25～55℃及pH6.0～8.0的范圍內(nèi)有較好的穩(wěn)定性;在最適條件下以L-DOPA為底物測得其Km值為10.05mmol/L。
　　3.部

5、分化學(xué)試劑對蕹菜葉酪氨酸酶的影響
　　甲醇、乙醇、異丙醇及抗壞血酸、檸檬酸、Ca2+和Pb2+對該酶有抑制作用。Mn2+、Zn2+、Co2+及低濃度Cu2+對該酶具有一定的激活作用。尿素、SDS、Li+、K+、Fe3+對該酶活性基本無影響，EDTA在0～40mmol/L范圍內(nèi)對酶活性有明顯的抑制作用，濃度超過40mmol/L，則對該酶活性沒有影響。
　　4.蕹菜葉酪氨酸酶的功能基團(tuán)研究
　　研究結(jié)果表明:二硫鍵和組氨酸