1、目的:觀察富血小板血漿對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型軟骨病理狀態(tài)、IL-1β及Wnt/β-Catenin信號(hào)通路的影響，探討其作用機(jī)制。
　　方法:48只清潔級(jí)新西蘭大白兔隨機(jī)分為正常組(Normal group)、空白對(duì)照組(Sham group)、模型組(Model group)和實(shí)驗(yàn)組(PRP group)，每組12只(n=12)。正常組左膝關(guān)節(jié)不做任何處理;空白對(duì)照組僅切開左膝關(guān)節(jié)腔，不做其他任何處理;模型組和實(shí)驗(yàn)組行改良Hulth法

2、制作左膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎模型。造模1周后對(duì)實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物取自體耳靜脈血10ml，按Aghaloo法制備富血小板血漿0.8ml行左膝關(guān)節(jié)腔注射;空白對(duì)照組與模型組關(guān)節(jié)腔內(nèi)按相同方法注射等量生理鹽水(0.8ml)。一周注射一次，連續(xù)注射6周后對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物左膝關(guān)節(jié)進(jìn)行X線攝片，肉眼和鏡下觀察軟骨病理改變并進(jìn)行評(píng)分;電鏡下觀察軟骨細(xì)胞超微結(jié)構(gòu);免疫組化檢測(cè)軟骨中Ⅱ型膠原、IL-1β及滑膜中IL-1β的含量，ELISA法檢測(cè)關(guān)節(jié)液、血清中IL-1β含量并進(jìn)

3、行相關(guān)性分析;實(shí)時(shí)定量PCR和Western Blot分別檢測(cè)Wnt/β-Catenin信號(hào)通路中Wnt1、GSK-3β及β-catenin mRNA與蛋白的含量。
　　結(jié)果:X線片觀察正常組和空白對(duì)照組關(guān)節(jié)X線無明顯變化;模型組膝內(nèi)側(cè)的股骨脛骨關(guān)節(jié)間隙變窄明顯，關(guān)節(jié)面不平整，關(guān)節(jié)邊緣有大量骨贅形成，可及呈高密度改變的軟骨下骨;實(shí)驗(yàn)組關(guān)節(jié)退行性變化較模型組輕。關(guān)節(jié)軟骨Pelletier JP及Mankin's評(píng)分正常組和空白對(duì)照組

4、較模型組明顯降低(P＜0.05);實(shí)驗(yàn)組較模型組關(guān)節(jié)軟骨Pelletier JP及Mankin's評(píng)分明顯降低(P＜0.05)。透射電鏡觀察到正常組和空白對(duì)照組軟骨細(xì)胞病理改變不明顯，模型組軟骨細(xì)胞損傷程度較實(shí)驗(yàn)組重。Masson與甲苯胺藍(lán)染色分別檢測(cè)到正常組和空白對(duì)照組軟骨中膠原與蛋白多糖含量染色面積率和平均灰度值較模型組明顯增高(P＜0.05);實(shí)驗(yàn)組較模型組染色面積率和平均灰度值明顯增高(P＜0.05)。免疫組化檢測(cè)正常組和空白對(duì)

5、照組軟骨Ⅱ型膠原陽性細(xì)胞分?jǐn)?shù)和平均積分光密度較模型組明顯增高(P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組較模型組陽性細(xì)胞分?jǐn)?shù)和平均積分光密度明顯增高(P＜0.05)。正常組和空白對(duì)照組軟骨、關(guān)節(jié)液及血清中IL-1β含量明顯低于模型組(P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組IL-1β含量明顯低于模型組(P＜0.05)，且關(guān)節(jié)液與血清中IL-1β成正相關(guān)(r2=0.8702，P=0.0000)。倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞2代以內(nèi)培養(yǎng)可以保持細(xì)胞表型穩(wěn)定。富血

6、小板血漿組軟骨細(xì)胞中Wnt1和β-catenin mRNA及蛋白的表達(dá)量較生理鹽水組明顯減少(P＜0.05);與抑制劑組比較富血小板血漿組Wnt1和β-catenin mRNA及蛋白的表達(dá)量增高(P＜0.05)，低于激動(dòng)劑組(P＜0.05);富血小板血漿組GSK-3βmRNA及蛋白的表達(dá)量較生理鹽水組明顯增加(P＜0.05);與抑制劑組比較富血小板血漿組GSK-3βmRNA及蛋白表達(dá)量降低(P＜0.05)，富血小板血漿組GSK-3βmR