1、楊樹(shù)生長(zhǎng)迅速，豐產(chǎn)，木材用途廣，是短期輪伐造林時(shí)普遍選用的樹(shù)種。此外，楊樹(shù)人工林在生態(tài)環(huán)境治理中占有重要的地位。然而，楊樹(shù)是一種多年生樹(shù)種，整個(gè)生長(zhǎng)周期都會(huì)受到病害的威脅，各種病害嚴(yán)重影響楊樹(shù)的生長(zhǎng)發(fā)育，造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。WRKY基因普遍地介入到植物對(duì)環(huán)境脅迫的應(yīng)答、植物的生長(zhǎng)發(fā)育、代謝調(diào)控、植物對(duì)多種病原體的防御響應(yīng)等一系列生理活動(dòng)。
　　本研究利用生物信息學(xué)軟件及在線楊樹(shù)等植物的全基因組數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)楊樹(shù)PtrWRKY54基因進(jìn)

2、行系統(tǒng)發(fā)育分析、序列分析、表達(dá)模式分析、亞細(xì)胞定位分析、轉(zhuǎn)錄活性分析。此外，我們克隆得到了PtrWRKY54基因并構(gòu)建過(guò)表達(dá)載體，利用葉盤法對(duì)南林95楊樹(shù)進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，并對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了抗生素篩選、PCR鑒定和GUS染色鑒定。獲得以下主要結(jié)果：
　　1.從南林95楊中克隆得到楊樹(shù)PtrWRKY54。該基因CDS全長(zhǎng)為969bp，推定蛋白長(zhǎng)度為322aa。預(yù)測(cè)的編碼蛋白擁有1個(gè)WRKY domain和1個(gè)C2HC型的鋅指結(jié)構(gòu)。

3、r>　　2.系統(tǒng)發(fā)育分析表明：16個(gè)同源WRKY基因分別聚成單子葉和雙子葉2個(gè)大枝上；PtrWRKY54與抗病相關(guān)的兩個(gè)WRKY基因PtrWRKY89和AtWRKY70的進(jìn)化關(guān)系較近。序列分析表明：PtrWRKY54與擬南芥AtWRKY70的motif和基因結(jié)構(gòu)高度相似；啟動(dòng)子區(qū)域作用元件分析表明PtrWRKY54啟動(dòng)子區(qū)域含有抗真菌誘導(dǎo)子響應(yīng)元件與防衛(wèi)和脅迫響應(yīng)元件。
　　3.組織表達(dá)模式分析發(fā)現(xiàn)PtrWRKY54在分化中的木質(zhì)

4、部中表達(dá)量最高。誘導(dǎo)表達(dá)模式分析表明該基因表達(dá)量受SA處理后明顯升高，傷害的誘導(dǎo)次之，MeJA處理最不明顯；兩種活體柵銹菌混合處理比單獨(dú)處理時(shí)表達(dá)量高。
　　4. PtrWRKY54-GFP融合表達(dá)載體轉(zhuǎn)化本氏煙葉片進(jìn)行亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示PtrWRKY54定位在細(xì)胞核。
　　5.構(gòu)建pGBKT7-PtrWRKY54載體進(jìn)行酵母轉(zhuǎn)錄活性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明PtrWRKY54具有自轉(zhuǎn)錄活性。
　　6.構(gòu)建pRI201-AN