三聚氰胺、環(huán)丙沙星、喹乙醇和己烯雌酚殘留的酶聯(lián)免疫吸附檢測法的建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、近年來,畜牧業(yè)得到了迅速的發(fā)展,在該過程中獸藥和飼料添加劑起了十分重要的作用。但是,獸藥的超標(biāo)使用不可避免的導(dǎo)致了其在動物體內(nèi)的大量殘留,并通過食物鏈對人體健康造成威脅,蓄積毒性容易導(dǎo)致器官的病變甚至癌變,畜產(chǎn)品的藥物殘留問題已引起全世界的廣泛關(guān)注。為了有效地控制動物性產(chǎn)品中的藥物殘留,結(jié)合國內(nèi)外先進(jìn)經(jīng)驗和技術(shù),篩選出一套可行的藥物殘留量的檢測方法,對確保經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展,保障人民身體健康,具有直接的經(jīng)濟(jì)效益和廣泛的社會意義。
  

2、 三聚氰胺原是一種化工原料,但因其含氮量高,價格低廉,最近被一些追求經(jīng)濟(jì)利益的不法分子用作食品添加劑,以提高食品檢測中的蛋白質(zhì)含量。美國發(fā)生的多起寵物貓、狗中毒死亡事件及我國發(fā)生的奶制品恐慌事件已引起了人們的高度重視,許多國家已規(guī)定了食物中三聚氰胺的最高檢出上限,因此亟需建立方便可靠的三聚氰胺的檢測方法。
   目前,很多國家已經(jīng)為此而建立了一些藥物殘留的檢測方法。包括理化檢測法、微生物檢測法和免疫檢測法。理化檢測法主要包括L

3、C-MS-MS、LC-UV、HPLC、和LC-MS等。該類方法具有特異性好、穩(wěn)定、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn),可以作為標(biāo)準(zhǔn)方法,但對操作人員要求很高,儀器設(shè)備昂貴,笨重,樣品前處理復(fù)雜、需要大量的溶劑,費(fèi)力、費(fèi)時、不易普及,不適合大規(guī)模樣品的即時檢測。微生物檢測法雖然對大量樣品進(jìn)行即時檢測,但是靈敏度不夠高,不能進(jìn)行準(zhǔn)確的定性定量分析。免疫檢測法主要包括CL-ELISA、EICA、ELISA等,該類方法克服了以上方法的缺點(diǎn),是一種方便、靈敏、快速的檢測

4、方法,可以滿足量樣品的即時檢測,發(fā)展前景廣闊。而結(jié)合了化學(xué)發(fā)光分析的酶聯(lián)免疫吸附檢測法(CL-ELISA),有更寬的線性范圍,著更高的靈敏度,是酶聯(lián)免疫吸附檢測法的發(fā)展趨勢。
   對于三聚氰胺的研究的檢測,分別采用多種方法合成免疫原和包被抗原并制得了相應(yīng)的抗體,通過不同包被與不同方案的免疫原產(chǎn)生的抗體的交叉測定,用EDC法合成的免疫原與EDC法得到的包被抗原是成功的。用間接競爭化學(xué)發(fā)光ELISA檢測三聚氰胺的抗體,檢測結(jié)果為:

5、IC50是1.7μg·mL-1,檢測限為0.5μg·mL-1,該抗體跟其他結(jié)構(gòu)相似的藥物交叉率均很小,用此抗體檢測三聚氰胺在牛奶中的添加回收率,批內(nèi)變異系數(shù)范圍是4~19%,批間變異系數(shù)范圍是5~17%,批內(nèi)回收率范圍是89~112%,批間回收率范圍是85~105%。
   對于環(huán)丙沙星的檢測,其免疫原與包被抗原均用EDC法制得。其抗體用間接競爭化學(xué)發(fā)光ELISA檢測,檢測結(jié)果為:IC50是0.7 ng·mL-1,檢測限為0.0

6、1 ng·mL-1,該抗體除對加替沙星和氧氟沙星交叉率較高外,對其他藥物交叉率較小。用此抗體檢測環(huán)丙沙星在牛奶中的添加回收率,批內(nèi)變異系數(shù)范圍是3~20.2%,批間變異系數(shù)范圍是6~19%,批內(nèi)回收率范圍是73-111%,批間回收率范圍是70~112%。
   對于喹乙醇及其代謝物,從喹乙醇的還原產(chǎn)物出發(fā),用CDI法和DSC法合成了免疫原及包被抗原,從喹乙醇的代謝物出發(fā),通過EDC法和混酐法合成了免疫原及包被抗原,并分別制得了相

7、應(yīng)的抗體。
   對于己烯雌酚的研究,用BSA和OVA分別合成了己烯雌酚的免疫原和包被抗原,制得抗體的IC50為275 pg.mL-1,檢測限為90 pg.mL-1。通過與乙炔基雌二醇、雌激素酮和雌三醇的交叉率試驗測定了抗體的特異性,回收率大于79.5%,批內(nèi)和批間大約相差6%,變異系數(shù)小于10%。在魚蝦、肝、飼料和尿液中的添加檢測限分別為為600 pg.mL-1,600 pg.mL-1,4800 pg.mL-1、600 pg.

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