1、隨著社會(huì)的進(jìn)步和生活水平的提高，人們對(duì)食品安全越來(lái)越重視，尤其關(guān)注食品中存在的對(duì)人體健康產(chǎn)生不利影響的獸藥殘留。作為七大獸藥殘留中的一大類(lèi)，β-受體激動(dòng)劑因其顯著的營(yíng)養(yǎng)再分配作用，常被非法用在畜牧業(yè)生產(chǎn)中。肉制品中殘留的β-受體激動(dòng)劑通過(guò)食物鏈可在人體內(nèi)累積，危害消費(fèi)者的身體健康。由β-受體激動(dòng)劑引發(fā)的各類(lèi)中毒事件也是時(shí)有發(fā)生，造成了惡劣的社會(huì)影響。因此，急需建立方便快速的檢測(cè)方法加強(qiáng)對(duì)這類(lèi)β-受體激動(dòng)劑的監(jiān)管。本文希望通過(guò)制備高靈敏度

2、、高特異性的苯乙醇胺 A和沙丁胺醇單克隆抗體，建立相應(yīng)的酶聯(lián)免疫吸附分析方法(ELISA)，用來(lái)有效的監(jiān)測(cè)實(shí)際樣品中的β-受體激動(dòng)劑殘留。
　　苯乙醇胺A（Phenylethanolamine A，PA）是近年來(lái)出現(xiàn)的一種新的β-受體激動(dòng)劑，目前作為促生長(zhǎng)劑被非法用于畜牧業(yè)中。本研究成功制備了針對(duì)苯乙醇胺 A的特異性單克隆抗體，在此基礎(chǔ)上建立了高靈敏度、高特異性的用于檢測(cè)動(dòng)物組織樣品中苯乙醇胺A的ELISA法。首先對(duì)苯乙醇胺A的分

3、子結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，使之成為帶氨基的半抗原衍生物，再與載體蛋白即牛血清白蛋白（Bovine serum albumin, BSA）或卵清白蛋白（Ovalbumin, OVA）偶聯(lián)，形成免疫原以及包被原。其中以PA-BSA偶聯(lián)物為免疫原免疫小鼠，取免疫小鼠的脾細(xì)胞與小鼠的骨髄瘤細(xì)胞融合后獲得了一株靈敏度較高的單克隆抗體細(xì)胞株。以單克隆抗體為基礎(chǔ)建立了檢測(cè)苯乙醇胺 A的間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA法，并對(duì)方法的靈敏度，特異性，精確度以及準(zhǔn)確性進(jìn)行了表征

4、。在最優(yōu)條件下，基于同源性包被抗原/抗體測(cè)定苯乙醇胺 A的ELISA法的IC50為0.16 ng/mL，檢出限（LOD）為0.011 ng/mL，比已有文獻(xiàn)的靈敏度高1.3-17倍。與其它十四種β-受體激動(dòng)劑的交叉反應(yīng)低于0.59％，證明所建立的ELISA不僅靈敏度高，而且特異性強(qiáng)。選擇豬肉以及豬肝作為實(shí)際樣品進(jìn)行樣品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，回收率在91.40-105.51%，批內(nèi)變異系數(shù)(Coefficients of variation, C

5、V)為1.56–9.92%(n=3)，批間CV為2.02-11.71%(n=3)。用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC–MS/MS）對(duì)ELISA進(jìn)行驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)兩種方法結(jié)果的相關(guān)系數(shù)為0.98，相關(guān)性良好。本文所建立的ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可靠的特點(diǎn)，可用于實(shí)際樣品中苯乙醇胺 A的檢測(cè)。
　　沙丁胺醇是繼克倫特羅之后另一種被普遍濫用的β-受體激動(dòng)劑。本研究通過(guò)丁二酸酐法合成沙丁胺醇衍生物，使之帶有活性基團(tuán)羧基，再與載