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![萊菔硫烷對脂肪細胞的代謝調控作用及分子機制研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/11/10/dfb73009-a51d-4d1b-a6c8-cc4a75b24d62/dfb73009-a51d-4d1b-a6c8-cc4a75b24d621.gif)
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文檔簡介
1、目的:以3T3-L1成熟脂肪細胞為模型,研究萊菔硫烷(sulforaphane,SFN)對3T3-L1成熟脂肪細胞糖、脂代謝的影響及其潛在的分子機制。
方法:經典激素雞尾酒(methylisobutylxanthine,dexamethasone and insulin,MDI)法誘導3T3-L1前脂肪細胞分化成為成熟脂肪細胞。油紅 O染色法直接觀察3T3-L1前脂肪細胞在誘導分化過程中的脂質積聚情況,2-N[7-硝基苯-2-
2、乙二酸,34羥氨基]-2-脫氧葡萄糖(2-NBDG)染色法檢測誘導分化過程中脂肪細胞的葡萄糖攝取變化,以探索SFN干預的最佳時點。低濃度(0-10.0μmol/L)SFN干預3T3-L1成熟脂肪細胞48h,經2-NBDG染色后,分別用共聚焦和多功能酶標儀定性、定量檢測 SFN處理的成熟脂肪細胞內的葡萄糖攝取變化,蛋白印跡法和實時熒光定量 PCR法分別檢測 SFN干預48h對葡萄糖攝取和代謝相關蛋白 GLUT-4、GCK、CS及基因 AC
3、C、FAS表達的影響;甘油 GPO-POD酶法檢測成熟脂肪細胞經 SFN處理后培養(yǎng)基中的甘油含量,間接評價SFN對白色脂肪細胞脂質水解的影響,蛋白印跡法檢測 SFN干預48h對白色脂肪細胞脂質分解代謝相關蛋白 ATGL、HSL、p-HSLSer563、p-HSLSer565、p-HSLSer660、Perilipin、CPT1A、CS、DGAT-1表達的影響,綜合評價SFN處理對3T3-L1成熟脂肪細胞葡萄糖和脂質代謝的影響,探討SFN
4、調控白色脂肪細胞的糖、脂代謝作用及分子機制。
結果:誘導分化過程中的3T3-L1前脂肪細胞葡萄糖攝取和脂質積累逐漸增加,到分化第10天逐漸趨于穩(wěn)定,故本課題選擇誘導分化第10天的3T3-L1脂肪細胞作為本研究對象。2-NBDG染色顯示,SFN可顯著增強3T3-L1成熟脂肪細胞的葡萄糖攝取。甘油GPO-POD酶法檢測提示,SFN干預可明顯增加脂肪細胞的脂質水解作用。蛋白印跡法和實時熒光定量PCR法檢測表明,SFN可上調葡萄糖攝取
5、相關蛋白GLUT-4,葡萄糖有氧氧化相關蛋白GCK、CS,脂質水解相關蛋白HSL、p-HSLSer563、p-HSLSer660和脂肪酸β氧化相關蛋白CPT1A的表達,同時下調脂肪酸合成相關基因ACC、FAS,脂質水解相關蛋白p-HSLSer565、Perilipin,甘油三酯合成相關蛋白DGAT-1的表達。
結論:低濃度(0-10μmol/L)SFN干預可通過上調葡萄糖攝取和代謝相關蛋白GLUT-4、GCK、CS的表達,增強
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