1、目的：
　　 1．建立高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗的大鼠模型。
　　 2．初步篩選出肝臟可能參與胰島素抵抗發(fā)生的mRNA、蛋白（粗提線粒體）、miRNAs，為后續(xù)工作準(zhǔn)備。
　　 3．進(jìn)一步了解胰島素抵抗的形成機(jī)制，并為診斷、治療和改善胰島素抵抗提供的潛在靶點(diǎn)。
　　 方法：
　　 1．實(shí)驗(yàn)動物：13只雄性SD大鼠（普食組6只，高脂組7只），4-5w，130g左右；高脂配方：基礎(chǔ)飼料80％，豬油18％，膽固

2、醇2％。監(jiān)測體重，根據(jù)HOME-IRI、GTTs、ITTs判斷系統(tǒng)胰島素抵抗形成后處理大鼠，觀察肝臟外觀、稱其濕重，進(jìn)行血清基礎(chǔ)生化、游離脂肪酸譜檢測，肝臟透射電鏡、線粒體拷貝數(shù)、能量指標(biāo)、ROS檢測。
　　 2．肝臟基因表達(dá)譜：肝臟總RNA提取后行mRNA表達(dá)譜芯片檢測(IlluminaRatRef12Beadchip)，結(jié)果行KEGG分析。
　　 3．肝臟粗提線粒體蛋白質(zhì)組：租提肝臟線粒體蛋白，2-D分析找差異蛋白，

3、挖取做MALDI-TOF質(zhì)譜分析，然后Mascot軟件分析，數(shù)據(jù)再KOG分類。
　　 4．肝臟miRNAs：肝臟總RNA提取后行miRNA的IlluminaSolexa測序、結(jié)果使用Mirtools軟件分析，對差異miRNAs用real-timePCR進(jìn)行驗(yàn)證，后用miRDB軟件進(jìn)行靶基因預(yù)測。
　　 5．對差異mRNA、蛋白質(zhì)、miRNAs進(jìn)行綜合分析。
　　 結(jié)果：
　　 1．第12周時，HOME-I

4、RI、GTTs、ITTs結(jié)果提示系統(tǒng)胰島素抵抗形成，此時表現(xiàn)為肥胖，脂肪肝，肝濕重增加，血脂紊亂，血清游離脂肪酸譜異常，電鏡顯示肝細(xì)胞內(nèi)大量脂滴堆積、線粒體腫脹、胞核被擠壓或固縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生，線粒體拷貝數(shù)明顯降低，ROS明顯升高，能量指標(biāo)無明顯變化。
　　 2．對提取合格的肝臟總RNA用含24000個探針的大鼠全基因組芯片檢測，經(jīng)校正和差異分析后獲得1756個差異基因，進(jìn)一步采用FDR后還有502個，顯著上調(diào)的290個，顯著下調(diào)

5、的212個。再經(jīng)KEGG通路分析，發(fā)現(xiàn)物質(zhì)代謝、炎癥免疫通路、氧化/抗氧化系統(tǒng)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、細(xì)胞骨架等的變化。
　　 3．對粗提的肝臟線粒體蛋白行2-D分析，分離到的蛋白點(diǎn)數(shù)普食組1012±45.53，高脂組1029.67±42.72個，差異點(diǎn)128個；取其中105個做MALDI-TOF質(zhì)譜分析，數(shù)據(jù)經(jīng)搜庫及分析整理，最終確定24個差異蛋白，即和普食組相比，高脂組中顯著上調(diào)的9個蛋白，顯著下調(diào)的15個蛋白；KOG分類發(fā)

6、現(xiàn)它們主要參與生物代謝、細(xì)胞生命過程及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等。
　　 4．對提取合格的肝臟總RNA用Solexa法對其miRNAs進(jìn)行測序，結(jié)果行Mirtools數(shù)據(jù)分析，獲得的已知miRNAs中普食組236個，高脂組239個，未知miRNAs中普食組22個，高脂組141個，差異miRNAs10個。對差異miRNAs進(jìn)行相對定量PCR，獲1.5倍以上差異的miRNAs8個，用miRDB軟件進(jìn)行靶基因預(yù)測發(fā)現(xiàn)一些炎癥、糖利用、細(xì)胞分化等相關(guān)的