1、高速逆流色譜技術(shù)(High-SpeedCountercurrentChromatography)是一項(xiàng)連續(xù)的液-液分配色譜技術(shù)，其具有無(wú)固相載體、樣品無(wú)需嚴(yán)格預(yù)處理等優(yōu)點(diǎn)，目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于食品、天然產(chǎn)物、生物技術(shù)、醫(yī)藥、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域。然而，現(xiàn)有的研究基本局限于采用高速逆流色譜的有機(jī)相-水相溶劑系統(tǒng)來(lái)分離純化天然產(chǎn)物，在分離多糖、蛋白質(zhì)、核酸的研究中因有機(jī)溶劑不能溶解生物大分子而受到限制。但隨著近年來(lái)雙水相體系的迅速發(fā)展，高速逆流色譜

2、在研究分離多糖、蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。因此，本文主要從制備型高速逆流色譜技術(shù)與雙水相溶劑體系分離純化蘆薈多糖方面進(jìn)行研究，為分離純化粗多糖提供一種新的方法。
　　 在國(guó)內(nèi)，蘆薈多糖的分離純化比較傳統(tǒng)、經(jīng)典的方法大多是采用凝膠柱層析技術(shù)。該方法有方便，選擇性大，對(duì)實(shí)驗(yàn)技能要求低等優(yōu)點(diǎn)，但同時(shí)存在著機(jī)械化程度低、耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)、制備量少等缺點(diǎn)。本研究將高速逆流色譜技術(shù)與凝膠柱層析技術(shù)結(jié)合進(jìn)行對(duì)蘆薈粗多糖的分離純化，不但

3、克服了耗時(shí)、機(jī)械化程度低、制備量少的特點(diǎn)，而且使高速逆流色譜在分離多糖方面進(jìn)行了創(chuàng)新。
　　 蘆薈有著很多重要醫(yī)用藥用價(jià)值，但其化學(xué)成分相當(dāng)?shù)膹?fù)雜。目前，人們研究出的蘆薈的生理活性主要都是針對(duì)多種組分共同作用的，通常起主要作用的只是其中的很重要的一類。要研究具體某一種活性物質(zhì)的價(jià)值，就必須對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行分離純化。蘆薈多糖是蘆薈中最為重要的生物活性成分之一，具有提高免疫力、抗腫瘤、降血脂等生理功能。他們是醫(yī)藥及化妝品的天然原料，有著

4、極其重要的研究利用價(jià)值。
　　 本文就是以此為目的，旨在研究運(yùn)用高速逆流色譜與凝膠層析技術(shù)聯(lián)合從庫(kù)拉索蘆薈凝膠中分離純化蘆薈多糖的方法，主要討論了溶劑系統(tǒng)的組成、配比，及分配系數(shù)等用于高速逆流色譜分離的重要參數(shù)。其分離出的兩個(gè)組分繼續(xù)用凝膠層析技術(shù)進(jìn)一步純化，從而達(dá)到純化為單一組分的目的，并研究其在小鼠活體實(shí)驗(yàn)中的降血脂作用。
　　 首先，通過采用基本方法對(duì)蘆薈主要物質(zhì)成份的測(cè)定可知，蘆薈凝膠中含有98.74％的水分，總

5、糖含量蘆薈全葉要高于蘆薈凝膠，為1.164％；蘆薈全葉中蛋白質(zhì)的含量主要在蘆薈凝膠中，其外皮含量較少，蘆薈凝膠中的灰分含量較低，僅為0.156％。
　　 其次，采用響應(yīng)曲面法對(duì)蘆薈多糖提取工藝參數(shù)的模型分析，超聲波輔助提取庫(kù)拉索蘆薈凝膠中多糖的最佳工藝為：超聲時(shí)間為45.85min，提取液pH值為8.74，液料比為29.84mL/g，對(duì)最佳工藝修正后得到的3次蘆薈多糖平均提取率為11.332mg/g，采用蒽酮-濃硫酸法測(cè)得提取出

6、的粗多糖含量為51.49％。
　　 再次，通過紫外-可見分光光度計(jì)法對(duì)高速逆流色譜儀分離蘆薈多糖的溶劑系統(tǒng)進(jìn)行研究，探索出分離蘆薈多糖的溶劑系統(tǒng)為w(PEG600)：w(KH2PO4)：w(K2HPO4)：w(H2O)=5:15:15:65，加入的NaCl的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％。采用此系統(tǒng)在轉(zhuǎn)速為600r/min，固定相流速為8mL/min，流動(dòng)相流速為2mL/min，進(jìn)樣量濃度為7.5mg/mL，水浴溫度為30℃條件下，采用固定相-

7、進(jìn)樣-流動(dòng)相的進(jìn)樣順序，成功分離出蘆薈多糖的兩個(gè)組分(APS-1、APS-2)。采用SephadexG-150葡聚糖凝膠層析技術(shù)進(jìn)一步對(duì)APS-1純化，并考察了流速與進(jìn)樣量對(duì)分離效果的影響，通過不斷改變條件成功分離出單一組分的多糖APS-1-1，經(jīng)高效液相色譜技術(shù)檢測(cè)其純度高達(dá)98％，分子量為1300道爾頓。
　　 最后，通過對(duì)小鼠的高脂模型研究得出，蘆薈多糖APS-1-1在降低肥胖小鼠體重的同時(shí)能起到較好的降血脂作用，其中對(duì)總