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![人源脂聯(lián)素及其受體的表達純化和兩者間相互作用的研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/11/10/74b2b850-271c-4978-9f00-b85c1dc587a5/74b2b850-271c-4978-9f00-b85c1dc587a51.gif)
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文檔簡介
1、脂肪細胞分泌表達的脂聯(lián)素能夠識別、結(jié)合肝臟或骨骼肌中的脂聯(lián)素受體,通過下游AMPK、PPARα等途徑刺激葡糖糖攝取和脂肪酸氧化,維持體內(nèi)能量穩(wěn)態(tài),發(fā)揮胰島素增敏作用。脂聯(lián)素及其受體代謝或功能異常導(dǎo)致機體多種疾病的發(fā)生,如胰島素耐受、肥胖、動脈粥樣硬化等等,恢復(fù)其含量或功能能夠有效緩解各類疾病。因此,脂聯(lián)素及其受體成為治療胰島素耐受等疾病的全新重要靶點。在體內(nèi),脂聯(lián)素球形結(jié)構(gòu)域部分能夠結(jié)合肝中 AdipR1,形成配體-受體復(fù)合物,但兩者間
2、相互作用機制尚不清楚。
本文構(gòu)建了脂聯(lián)素(104-244)原核及昆蟲細胞表達系統(tǒng),鑒定及篩選了表達純化克隆,通過親和純化得到帶有GST或MBP融合蛋白的脂聯(lián)素蛋白及經(jīng)PPase和TEV水解去除融合蛋白后單獨的脂聯(lián)素蛋白,并對蛋白蛋白行為進行分子篩分析。結(jié)果顯示,試驗純化的到的脂聯(lián)素蛋白在自然條件下能形成二聚體。構(gòu)建了脂聯(lián)素受體1三種截短體(22-375、72-37、89-375)蛋白昆蟲細胞表達系統(tǒng),優(yōu)化蛋白表達及純化條件,純
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