1、研究目的：肺炎克雷伯菌為革蘭氏陰性桿菌，廣泛分布于自然界，亦存在于健康人與動(dòng)物的呼吸道和腸道中。當(dāng)機(jī)體免疫力下降或長期使用抗生素導(dǎo)致菌群失調(diào)時(shí)可引起感染。感染類型主要包括：肺炎、腦膜炎、肝膿腫、眼內(nèi)炎、泌尿系統(tǒng)發(fā)炎、傷口感染、敗血癥等。近年來，肺炎克雷伯菌已成為僅次于大腸桿菌的第二大條件致病菌，是引起社區(qū)獲得性感染與醫(yī)院院內(nèi)感染不可忽視的潛在病原體。
　　肺炎克雷伯菌毒力因子主要包括：莢膜多糖(K抗原)、I型菌毛、脂多糖(O抗原)

2、、鐵攝入能力等。莢膜多糖是肺炎克雷伯菌的主要毒力因子。根據(jù)莢膜多糖(K抗原)分型，可將肺炎克雷伯菌分為82個(gè)K血清型。其中K1、K2和K5血清型與人和動(dòng)物體的嚴(yán)重感染性疾病有密切關(guān)系。K1型菌株通常導(dǎo)致弗里德蘭德桿菌性肺炎，尤為突出的是化膿性肝膿腫并發(fā)癥。K2和K5血清型通常導(dǎo)致社區(qū)獲得性肺炎。鼻硬結(jié)病則與K3血清型相關(guān)。臨床分離自萎縮性鼻炎的肺炎克雷伯鼻炎亞種大多來自K4血清型和極少數(shù)K5血清型。K54和K57型菌株與群體侵入性肝膿腫

3、綜合征發(fā)病相關(guān)。相比其他血清型，K1、K2、K54和K57型為強(qiáng)毒力菌株，常見于肺炎病例中。尤其以K1和K2型毒力最強(qiáng)，近年來流行趨勢日趨嚴(yán)重，已成為臨床細(xì)菌性肝膿腫綜合征的主要致病菌。
　　目前國內(nèi)有關(guān)肺炎克雷伯菌的分離及鑒定、耐藥情況、產(chǎn)ESBLs的情況以及相關(guān)危險(xiǎn)因素、流行病學(xué)方面研究報(bào)道較多，而缺乏莢膜血清型和毒力基因方面的相關(guān)研究。因此我們對(duì)肺炎克雷伯菌臨床分離株進(jìn)行K血清型和毒力基因的檢測，欲了解我國重慶、北京、深圳三

4、地肺炎克雷伯菌株的血清型分布及流行趨勢，分析其毒力基因的分布特點(diǎn)和缺失情況，根據(jù)其分離菌株可能攜帶的毒力基因?qū)ζ淇赡軐?dǎo)致的疾病做出推測，從而為我國的肺炎克雷伯菌株分型、溯源、合理治療奠定理論基礎(chǔ)。
　　研究對(duì)象與方法：在本研究中，我們對(duì)來自我國重慶、北京、深圳三地的310株肺炎克雷伯菌株臨床分離株，通過提取菌株基因組DNA。采用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)，選用PCR的靶基因包括肺炎克雷伯菌體外溶血酵素基因khe及其毒力相關(guān)基因。PCR的反應(yīng)

5、體系為30μL體系，反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性3 min；94℃變性40 S，退火溫度48-58℃退火40 S，72℃延伸1 min，共30個(gè)循環(huán)。最終對(duì)其進(jìn)行K血清型檢測和毒力基因的篩查。
　　研究結(jié)果：經(jīng)PCR檢測后發(fā)現(xiàn)，310株菌中，K1、K2、K54、K57、K3、K5和K20型分別占14.2％、9.4％、6.5％、4.2％、2.5％、2.3％和1.9％。來自呼吸系統(tǒng)標(biāo)本的分離株中K1血清型菌株在4種檢測的強(qiáng)毒血清型中占首位

6、，為呼吸系統(tǒng)總數(shù)的17.4％。11種毒力基因都出現(xiàn)不同程度的缺失現(xiàn)象，無論是來自總體還是分別來自重慶、北京、深圳三地，其菌株中的ureA、wabG和fimH毒力因子檢出率均較高，相對(duì)的，iroNB毒力因子檢出率均為最低。各個(gè)血清型菌株中，ureA和wabG檢出率最高，均為陽性結(jié)果。除K5血清型外，iroNB檢出率均為最低。
　　研究結(jié)論：結(jié)果顯示310株肺炎克雷伯菌在已鑒別的4種強(qiáng)毒性血清型中K1血清型菌株所占比例高，較為流行。與

7、已鑒定的以上7種血清型相比，其他血清型所占比例較大，如需進(jìn)一步了解其他未鑒定的血清型菌株在國內(nèi)的分布，則需對(duì)臨床分離株進(jìn)行其他血清型分型，以期明確是其他血清型的肺炎克雷伯菌在我國的分布和流行趨勢。310株肺炎克雷伯菌中11種毒力基因都出現(xiàn)不同程度的缺失現(xiàn)象，推測其毒力因子的分布可能與血清型有一定的關(guān)系。本研究揭示了我國重慶、北京、深圳三地肺炎克雷伯菌株的血清型分布及流行趨勢，毒力基因的分布特點(diǎn)和缺失情況，從而為其分型、溯源、合理治療奠定