1、目的:制備肺炎克雷伯桿菌特異性卵黃抗體(IgY),考察其體外抑菌活性及對(duì)小鼠克雷伯桿菌肺炎的保護(hù)作用。
　　 方法:以滅活的肺炎克雷伯桿菌為抗原免疫蛋雞獲得特異性IgY。通過水稀釋、硫酸銨鹽析、硫酸鈉鹽析和超濾等方法分離純化抗體,再經(jīng)冷凍干燥制成凍干粉。利用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測抗體的純度;采用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定卵黃水溶性組分中的抗體效價(jià)。采用液體培養(yǎng)基比濁法考察不同濃度的特異性IgY對(duì)抗原菌的生長抑制活性。

2、經(jīng)鼻滴入肺炎克雷伯桿菌(2×1011cfu/ml)建立小鼠肺炎模型,攻毒劑量為每只100μl。小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組(不感染肺炎克雷伯桿菌)、陰性對(duì)照組(生理鹽水)、頭孢哌酮組(1 mg/ml)、地塞米松組(0.5mg/ml)、特異性IgY高劑量組(40mg/ml)、特異性IgY低劑量組(20mg/ml)。攻毒前24h給藥一次,除地塞米松組為每50μl/10g外,其余各組小鼠為150μl/10g;攻毒后每隔24 h給藥一次,連續(xù)四天,除

3、地塞米松組為100μl/10g外,其余各組小鼠為250μl/10g。觀察小鼠的臨床表現(xiàn)、體重、體溫、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、各組小鼠的死亡率、肺組織細(xì)菌培養(yǎng)、肺組織外觀及肺病理切片。
　　 結(jié)果:經(jīng)水稀釋、鹽析和超濾得到IgY的純度與標(biāo)準(zhǔn)IgY相近。ELISA檢測表明首次免疫后40～45天效價(jià)達(dá)到1600。體外抑菌試驗(yàn)表明,特異性IgY濃度在1～20 mg/ml之間能抑制肺炎克雷伯桿菌的生長且呈劑量依賴性,但其活性低于陽性對(duì)照頭孢哌酮。肺炎

4、克雷伯桿菌攻毒后,除空白對(duì)照組外,各組小鼠體溫、體重、外周血中WBC數(shù)均有不同程度下降,IgY治療組的下降明顯低于陰性對(duì)照組,與陽性對(duì)照頭孢哌酮組和地塞米松相近;除空白對(duì)照組外,其余各組小鼠肺組織細(xì)菌培養(yǎng)均呈陽性;IgY治療組和陽性對(duì)照組細(xì)菌計(jì)數(shù)低于陰性對(duì)照組;肺組織有不同程度的損傷,肺病理切片顯示肺泡結(jié)構(gòu)破壞、肺纖維化,IgY治療組和陽性組損傷程度低于陰性組;各組小鼠四天的死亡率分別為:空白對(duì)照組為O,陰性對(duì)照組為90％,其余均為80