1、蛋白質(zhì)是一類最重要、最基本的生物大分子,具有多種多樣的生物學(xué)功能。蛋白質(zhì)的功能取決于它的三維結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)有四級結(jié)構(gòu),其高級結(jié)構(gòu)被稱為蛋白質(zhì)的構(gòu)象。蛋白質(zhì)的構(gòu)象依靠一系列弱的作用力來維系,比如鹽鍵、疏水作用、氫鍵和范德華力。研究蛋白質(zhì)的構(gòu)象變化將幫助我們更好地弄清其生物學(xué)功能的成因。我們利用電噴霧質(zhì)譜并結(jié)合其他表征技術(shù),研究溶劑誘導(dǎo)的單體蛋白質(zhì)構(gòu)象變化。本論文的工作包括兩個部分:第一部分是對乙腈、甲醇誘導(dǎo)溶菌酶構(gòu)象變化的研究,另一部分是對

2、致敏型接觸性皮炎發(fā)病機(jī)制的研究。
　　 首先,采用電噴霧質(zhì)譜結(jié)合圓二色譜、熒光光譜,研究不同濃度的乙腈對溶菌酶構(gòu)象變化的影響。在pH=2的環(huán)境下,隨著乙腈濃度的上升,電噴霧質(zhì)譜的譜圖中溶菌酶電荷態(tài)分布會變寬。當(dāng)乙腈濃度達(dá)到70％時,會出現(xiàn)15+的高電荷離子峰,電荷中心也從純水溶劑的10+到了12+,表明蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化,即由天然構(gòu)象轉(zhuǎn)變?yōu)椴糠址钦郫B的構(gòu)象。在溶菌酶水溶液中加入乙腈后,圓二色譜顯示蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)中無規(guī)卷曲的

3、百分含量增加。熒光光譜進(jìn)一步證明在乙腈的作用下,溶菌酶由天然構(gòu)象轉(zhuǎn)變?yōu)椴糠址钦郫B的構(gòu)象。
　　 接著,利用電噴霧質(zhì)譜結(jié)合圓二色譜在測定了pH=2的條件下,不同甲醇濃度溶菌酶溶液的構(gòu)象。在甲醇濃度達(dá)到70％以前,電噴霧質(zhì)譜圖中溶菌酶的電荷態(tài)分布并沒有太大的變化。然而,當(dāng)甲醇濃度超過75％,以16+為中心的高電荷態(tài)分布開始出現(xiàn),并可以觀察到兩簇離子峰,表明溶菌酶的三級結(jié)構(gòu)已發(fā)生變化。與此同時,圓二色譜顯示溶菌酶的螺旋變性態(tài)的百分率明

4、顯地上升,其二級結(jié)構(gòu)也部分發(fā)生變化。由此可見,當(dāng)甲醇濃度超過75％,溶菌酶構(gòu)象將會由折疊態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榉钦郫B態(tài)。差示掃描量熱法的結(jié)果顯示,固體溶菌酶溶解于5％甲醇溶液以后,峰頂溫度Tm將由固體的為79.6℃上升到81.8℃,表明固體溶菌酶溶解于水以后,熱穩(wěn)定性略有升高。
　　 第二部分的工作——致敏型接觸性皮炎的發(fā)病機(jī)制研究,在本論文的第五章進(jìn)行了闡述。我們利用電噴霧質(zhì)譜、氫氘交換技術(shù)和紫外可見光譜測定了2,4-二硝基氟苯和模型蛋白細(xì)