1、目的：本課題利用單核細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化技術(shù)獲得不同表型巨噬細(xì)胞（M1、M2），用不同濃度姜黃素對 M1型巨噬細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)干預(yù)，通過細(xì)胞懸液創(chuàng)周局部注射的手段對大鼠創(chuàng)傷模型進(jìn)行差異化處理，并通過若干愈合指標(biāo)、細(xì)胞因子的測定，討論不同濃度姜黃素誘導(dǎo)的 M1型巨噬細(xì)胞后對創(chuàng)面愈合的影響。
　　方法：提取大鼠股骨骨髓細(xì)胞，并通過差速貼壁、M-CSF刺激等方法純化、激活獲得實(shí)驗(yàn)所需的巨噬細(xì)胞,應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)分析培養(yǎng)細(xì)胞結(jié)果。使用LPS刺激巨

2、噬細(xì)胞M0向M1轉(zhuǎn)化，IL-4誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M0向M2轉(zhuǎn)化，并應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)分析驗(yàn)證M1、M2誘導(dǎo)的有效性。應(yīng)用不同濃度姜黃素誘導(dǎo)M1型巨噬細(xì)胞向M2型巨噬細(xì)胞極化并獲得相應(yīng)細(xì)胞混懸液；應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)分析姜黃素對 M1誘導(dǎo)的極化效率，大鼠創(chuàng)傷模型的制備及其可用性的評價(jià)。實(shí)驗(yàn)大鼠背部制作6枚直徑6mm全層皮膚貫通傷模型，通過創(chuàng)面愈合率、HE染色分析評價(jià)所制模型的可用性。創(chuàng)面的實(shí)驗(yàn)條件干預(yù)及評價(jià)：實(shí)驗(yàn)動物分1天組、4天組、7天組、10天組

3、、14天組5組，每組5只。按照隨機(jī)雙盲的原則分別對每只大鼠的六枚創(chuàng)面做如下處理：①局部（皮下、真皮層及創(chuàng)基浸潤，同下）注射注射滅菌PBS；②局部注射M1+Cur0組細(xì)胞懸液；③⑥不做任何處理；④局部注射M1+Cur25組細(xì)胞懸液；⑤局部注射M2+Cur0組細(xì)胞懸液。到達(dá)實(shí)驗(yàn)天數(shù)后，處死實(shí)驗(yàn)鼠取標(biāo)本進(jìn)行愈合相關(guān)指標(biāo)的檢測、分析。通過創(chuàng)面未愈面積宏觀描述愈合速率的差異，HE染色、MASSON染色、免疫組化微觀分析導(dǎo)致愈合速率差異存在的原因。

4、
　　結(jié)果：
　　1.大鼠骨髓細(xì)胞培養(yǎng)CD45、CD68雙陽性細(xì)胞比率可達(dá)86.5%。
　　2.姜黃素刺激M1型巨噬細(xì)胞向M2型巨噬細(xì)胞極化的最佳作用濃度為25μmol/L，極化效率為29.59%。
　　3.大鼠背部不同解剖位置的六枚創(chuàng)面愈合速率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，HE染色結(jié)果無明顯差異。相對于空白對照組，M1+Cur0組創(chuàng)面可觀察到愈合延遲，HE染色及MASSON染色提示創(chuàng)面存在炎細(xì)胞浸潤時間長、肉芽組織生長緩慢；創(chuàng)

5、面愈合率、免疫組化（VEGF、bFGF、TGF-β1）定量分析提示相關(guān)指標(biāo)較空白對照組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。M2+Cur0組及 M1+Cur25組創(chuàng)面可觀察到愈合提前，上述指標(biāo)分析結(jié)果與M1+Cur0組相反且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PBS組與空白對照組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.M-CSF可體外誘導(dǎo)大鼠骨髓細(xì)胞形成巨噬細(xì)胞。
　　2.LPS、IL-4分別可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M1、M2極化。
　　3.姜黃素可誘導(dǎo)M1型巨噬