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文檔簡介
1、胚胎著床涉及胚胎和子宮之間一系列復雜的相互作用,許多基因參與其中。盡管已利用寡核苷酸芯片、cDNA芯片、DDRT-PCR等各種不同的技術篩選到一些著床相關基因,但胚胎著床的機制仍不清楚。為了全面了解胚胎著床相關分子和發(fā)現(xiàn)新的胚胎著床相關信號通路,我們首次應用基因表達系列分析(SAGE)技術,分析了小鼠早期妊娠第五天非著床位點和著床位點子宮的基因表達譜。 我們利用早期妊娠小鼠第五天的子宮分別構建了非著床位點和著床位點標簽長10bp
2、的兩個SAGE文庫,非著床位點測序的標簽數(shù)為51306個,對應16964個特異標簽,著床位點測序的標簽數(shù)為53214個,對應16733個特異的標簽。為了提高SAGE庫中標簽對應基因的比例,我們利用同一個SAGE文庫的序列文件,構建了標簽長11bp的兩個文庫,非著床位點的標簽總數(shù)為48121,對應16677個特異標簽,著床位點的標簽總數(shù)為50227,對應16696個特異的標簽。共有1039個標簽在非著床位點特異性表達,1252個標簽在著床
3、位點特異性表達。根據(jù)p值,195個標簽在非著床位點顯著上調,其中100個標簽是單一匹配的,261個標簽在著床位點顯著上調,其中127個是單一匹配的。 為了驗證SAGE結果的可信性,我們隨機選取14個單一匹配的標簽對應的基因(其中7個在著床位點上調,7個下調)進行RT-PCR驗證,所有這些基因的RT-PCR結果與SAGE結果中的表達趨勢一致。我們利用原位雜交對SAGE結果也進行了驗證。與非著床位點相比,1810014L12Rik、
4、Psmb5、Cd63、Npm1、Fads3和Tagln2在著床位點處的腔上皮下基質細胞中高表達。Ddx39在第5天著床位點腔上皮下基質中強表達,在非著床位點及假孕第5天未檢測到雜交信號。利用假孕及延遲著床模型發(fā)現(xiàn),Ddx39的表達受正在著床的活性胚泡的誘導。在卵巢切除的小鼠中,Ddx39的表達受雌激素顯著上調,孕酮對Ddx39的表達沒有明顯影響。這表明Ddx39可能在胚胎著床過程中發(fā)揮重要作用。 總之,我們成功地構建了早期妊娠小
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