1、第一部分，脂聯素對PDGF-BB誘導的腎小球系膜細胞增殖的影響及其機制研究
　　目的：探討重組人球形脂聯素蛋白對血小板源性生長因子-BB(PDGF-BB)誘導的腎小球系膜細胞(HMCs)增殖的影響及其內在機制。
　　方法：體外培養(yǎng)人腎小球系膜細胞(HMCs)，分別用不同濃度的PDGF-BB(0、1、5、10、20ng/ml)、不同濃度的重組人球形脂聯素蛋白(0、1、2.5、10μg/ml)、雷帕霉素(10nmol/l)和Co

2、mpoundC(AMPK抑制劑，10μmol/l)單獨或聯合干預HMCs于特定的時間，細胞計數及胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)滲入法檢測細胞增殖情況。將細胞隨機分為6組：對照組、PDGF-BB干預組、脂聯素干預組、PDGF-BB+脂聯素組、PDGF-BB+雷帕霉素組、PDGF-BB+脂聯素+Compound C組，Western blot檢測PI3K、AMPKα、TSC2、mTOR、S6K1蛋白磷酸化情況，免疫沉淀檢測脂聯素是否干擾PDG

3、F與其受體的結合。
　　結果：PDGF-BB能以劑量依賴性的方式促進HMCs生長；脂聯素單獨對HMCs生長沒有影響；脂聯素抑制PDGF-BB誘導的HMCs生長；Compound C則能抑制脂聯素的效應。PDGF-BB通過激活mTOR－S6K1信號通路誘導HMCs增殖；PDGF-BB誘導的mTOR-S6K1信號通路激活可以被脂聯素阻斷；脂聯素不干擾PDGF與其受體的結合。
　　結論：脂聯素通過激活AMPK信號通路抑制PDGF-

4、BB誘導的系膜細胞增殖，可用于HMCs功能紊亂所致腎臟疾病的防治。
　　第二部分，人脂聯素基因重組慢病毒對PDGF－BB誘導的HMCs增殖及其細胞外基質蛋白的影響
　　目的：探討人脂聯素重組慢病毒(Lenti－apM1－EGFP)對PDGF－BB誘導的HMCs增殖及其細胞外基質蛋白(ECM)的影響。
　　方法：將Lenti－apM1－EGFP感染HMCs，確定最佳感染復數(MOI)，并觀察其細胞毒性。RT－PCR法檢測

5、慢病毒干預后HMCs內脂聯素mRNA的表達。ELISA法檢測細胞上清液脂聯素蛋白水平。胸腺嘧啶核苷(3H－TdR)滲入法及流式細胞儀檢測PDGF－BB處理后HMCs及Lenti－apM1－EGFP感染后HMCs增殖及細胞周期進程改變。Western blotting檢測PDGF－BB處理后HMCs及Lenti-apM1-EGFP感染后HMCs內Ⅳ型膠原蛋白、層粘連蛋白、纖連蛋白表達水平。
　　結果：Lenti－apM1－EGFP對

6、HMCs無明顯毒性；MOI為50的Lenti-apM1－EGFP能夠有效的感染HMCs，并使之穩(wěn)定表達脂聯素蛋白(149.6±12.8)μg/l。PDGF-BB能夠顯著促進HMC增殖，加快細胞周期進程并誘導Ⅳ型膠原蛋白、層粘連蛋白、纖連蛋白表達，對Lenti-apMl-EGFP感染后HMCs則沒有此效應。
　　結論：Lenti-apM1-EGFP能夠安全有效的感染HMCs并使之穩(wěn)定表達脂聯素蛋白；脂聯素能夠抑制PDGF-BB誘導的

7、HMCs增殖及ECM合成；為以脂聯素為靶基因的基因治療奠定基礎。
　　第三部分，脂聯素基因重組慢病毒對早期糖尿病腎病小鼠腎臟的保護作用及其機制研究
　　目的：探討靜脈應用小鼠脂聯素基因重組慢病毒對早期糖尿病腎病模型小鼠的腎臟保護作用及其機制。
　　方法：40只C57BL/6小鼠隨機分為正常對照組(NC組)，糖尿病腎病組(DN組)，陰性對照病毒(Lenti-IRES-EGFP)治療組(DL組)，脂聯素基因重組慢病毒(Le

8、nti-Acdc-IRES-EGFP)治療組(DA組)，每組10只。采用腹腔小劑量多次注射鏈脲佐菌素(STZ)結合高脂高糖飲食的方法誘導小鼠糖尿病腎病模型。重組慢病毒注射8周后，觀測各組小鼠血漿脂聯素水平及腎組織形態(tài)學、腎功能、尿總蛋白、光鏡及電鏡下病理改變；應用western blot方法檢測肝組織脂聯素蛋白表達。應用ELISA法檢測小鼠血漿脂聯素蛋白表達。應用免疫組織化學法原位檢測腎組織增殖細胞核抗原(PCNA)、p-AMPKα、p

9、-mTOR蛋白表達；
　　結果：成功構建脂聯素超表達糖尿病腎病動物模型。與NC組比較，第12周末DA組小鼠腎臟肥大指數(KW/BW)、平均腎小球體積(MGV)、系膜面積比(FMA)、24h尿總蛋白(UTP)均明顯升高(P<0.05)，但低于DN組、DL組(P<0.05)。DA組腎組織PCNA陽性細胞數顯著低于DN組、DL組(P<0.01)。與DN組、DL組相比，DA組小鼠腎組織p-AMPKα蛋白表達顯著增高(P<0.01)，p-m